Modulación ambiental de la expresión de los factores de virulencia bajo el control de prfA en listeria monocytogenes

Résumé

Esta Tesis Doctoral se ha centrado en la caracterización del sistema de regulación de la virulencia de L. monocytogenes, mediado por el activador transcripcional PrfA. En primer lugar, determinamos los niveles basales de expresión de los factores de virulencia de L. monocytogenes in vitro, lo que nos permitió definir por primera vez el fenotipo silvestre de esta especie en lo que se refiere a la producción de factores de virulencia, así como identificar y caracterizar mutantes que sobreexpresan constitutivamente dichos factores. Identificamos el origen genético del fenotipo variante de sobreexpresión de los factores de virulencia, que consiste en el cambio de aminoácido GlyI45Ser en el regulador PrfA. Esta sustitución bloquearía a la proteína reguladora en una conformación constitutivamente activa con independencia de la presencia o no de un cofactor todavía no identificado, que sería necesario para activar a PrfA en las cepas silvestres. Tales observaciones nos han permitido establecer un modelo coherente que explica la regulación PrfA-dependiente. También caracterizamos el sistema de regulación de la virulencia a nivel transcripcional, analizando los efectos de la mutación en PrfA, la temperatura, la composición del medio extracelular y la fase de crecimiento bacteriano. Finalmente, demostramos que la capacidad de L. monocytogenes de utilizar glucosa-I-fosfato es estrictamente dependiente de PrfA y se coexpresa con los factores de patogenicidad, pudiendo constituir un nuevo factor de virulencia de Listeria.