Análisis funcional del gen mkc1 de c. albicans, que codifica una proteína quinasa map relacionada con la integridad celular

Resumen

La necesidad de encontrar nuevas dianas para el desarrollo de nuevos agentes antifungicos nos ha impulsado a investigar procesos celulares reguladores en un hongo patógeno, cándida albicans. Entre estos procesos se encuentran las rutas de transmisión de señales mediadas por proteinas quinasas que responden a sustancias mitogenicas (mapk). La clonación del gen mkc1 (map kinase from c. Albicans por complementación funcional del fenotipo de un mutante slt2 de S. Cerevisiae ha permitido definir, por primera vez, la existencia de este tipo de rutas en este hongo patógeno. Mkclp es una mapk de 58 kda con un 55% de identidad con slt2p (mpk1p) de S. Cerevisiae con todas las regiones características de estas proteinas. La complementación del fenotipo slt2 es especifica y no se produce con otros fenotipos de S. Cerevisiae producidos por la carencia de otras mapk como hog1 o fus3. Asimismo, mkc1p interacciona in vivo con mkk1p y mkk2p, meks que interaccionan con slt2p. La deleción del gen mkc1 se ha llevado a cabo secuencialmente para eliminar las dos copias de este gen en un organismo diploide como C. Albicans. Las cepas mkc1 /mkc1 / son viables a 28 y 37 grados c, pero sensibles al crecimiento a temperaturas superiores como 42 grados c y a la presencia de cafeína, siendo ambos fenotipos recuperables mediante la estabilización osmótica del medio. Se trata de la primera mapk que se ha relacionado con la resistencia a choques térmicos: los mutantes homozigoticos mkc1 mueren antes cuando se las someten a choques térmicos a 55 grados c. También, se ha demostrado que este gen es necesario para la adquisición de termotolerancia. Otros fenotipos son la mayor sensibilidad a enzimas degradativas de la pared celular y a sustancias que interfieren con la síntesis del 1,3-beta-glucano. Además, existen dos fenotipos no descritos previamente en mutantes en mapk, como la mayor sensibilidad a altas concentraciones extracelulares de calcio y la alter