Expresión de metaloproteasas de matrizcaracterización y medidas de actividad

Abstract

El objetivo básico de este trabajo es profundizar en el papel que juegan las diferentes metaloproteasas de matriz, destacando la recientemente descrita st-3, ya que el esclarecimiento de los mecanismos moleculares implicados en la metástasis permitirá en un futuro el diseño de agentes capaces de bloquear la diseminacion tumoral. Se ha utilizado el sistema de baculovirus para la expresión recombinante de las metaloproteasas matrilisina st-1 y st-3 humanas siendo purificadas de los extractos celulares correspondientes con buen rendimiento. Así mismo, se han purificado las gelatinasas a y b del medio condicionado de una línea celular de fibrosarcoma humano ht 1080. Las proteasas recombinantes fueron sometidas a caracterización, presentando las mismas características de procesamiento y expecificidad de sustrato que las proteasas nativas o que las expresadas en otros sistemas. Se han puesto a punto ensayos cuantitativos de actividad de metaloproteasas empleando sustratos fluorescentes, que permiten la búsqueda de inhibidores de dichas proteasas y que presentan ventajas sobre los ensayos radiactivos análogos empleados con este fin.