Síntesis, caracterización y aplicaciones de nuevas sondas moleculares fluorescentes para membranas y proteínasÁcidos penta-enoicos conjugados y derivados de taxol

Resumen

En el presente trabajo se describe la síntesis, la evaluación y las numerosas aplicaciones de dos series de nuevas sondas moleculares fluorescentes, basadas en ácidos grasos pentaenoicos lineales y conjugados (ácidos copa), y en derivados del agente antitumoral taxol con grupos cromóforos unidos covalentemente. Los ácidos copa se han obtenido empleando racionalmente la reacción de olefinacion de aldehidos de wittig, mediante reacción con el adecuado iluro de fosfonio, o de wittig-horner, con fosfonoacetato de etilo. Los derivados fluorescentes del taxol ha sido sintetizados fundamentalmente mediante la esterificación, tras las adecuadas reacciones de proteccion-desproteccion, del grupo alcohólico en posición 7 con alanina, y posterior reacción del grupo amino libre, introducido así en la olecula, con colorantes fluorescentes con grupos selectivamente reactivos del nh2. Las estructuras de las nuevas moléculas se han confirmado mediante las técnicas espectroscópicas habituales: ms, uv-visible, ir, 1h y 13c-rmn. Con las técnicas adecuadas de fluorescencia en estado estacionario y con resolución temporal de nanosegundos se ha demostrado que los nuevos ácidos pentaenoicos conjugados son muy útiles para obtener información sobre las membranas celulares (especialmente sobre su estado y sus componentes proteicos) y que dichos ácidos son notablemente mejores para estos fines que las sondas usadas hasta ahora. Algunas sondas fluorescentes derivadas del taxol especialmente las que llevan incorporado el cromóforo de fluoresceina, son eficientes marcadores de ciertas proteínas presentes en el interior de las células, como la tubulina o sus productos de polimerización, los microtubulos de citoesqueleto, abriendo de este modo nuevos métodos para el estudio del mecanismo de acción del taxol. En esta linea, se ha podido demostrar que el grupo oh en posicion 2' de esta droga es imprescindible para su acción antitumoral, y que la conformación en med