Desarrollo de un nuevo método electroforético para la determinación de la glicosilación de proteínas y lipoproteínas en suero humano, su relación con la peroxidación lipídica

Resumen

La glicosilación no enzimática es un proceso post-traduccional que sufren muchas proteínas estructurales y plasmáticas. Se ha demostrado en sujetos normales y, en mayor grado, en pacientes diabéticos, pues depende de la concentración de glucosa plasmática. La modificación de la estructura proteica y, en consecuencia, de su función es la causa de numerosas de las secuelas patológicas de la diabetes. Por otro lado, la hiperglicemia provoca un incremento de la concentración plasmática de radicales libres por lo que, probablemente, los pacientes diabéticos presentan un incremento de la concentración sérica de lipoperóxidos. Una vez que las proteínas han sufrido el proceso de glicosilación, los aductos azúcar-proteína sufren una autoxidación. Si se trata de una lipoproteína, como la LDL la autoxidación se suma a la oxidación que tiene lugar en la fracción lipídica (ácidos grasos insaturados). Tanto la LDL modificada por glicosilación (LDL-glc) como la modificada por oxidación (LDL-O) o modificada por ambos procesos, LDL-glicoxidada, resultan aterógenas. Un diagnóstico precoz de la diabetes y un adecuado control de la misma una vez diagnosticada, podrían ser claves para evitar las complicaciones cardiovasculares de estos pacientes. Teniendo en cuenta estos factores, los objetivos fundamentales del presente trabajo han sido: (1) determinar qué parámetro de control del metabolismo hidrocarbonado es más adecuado para realizar el diagnóstico precoz de la diabetes tipo II. (2) Desarrollar y optimizar una técnica nueva de electroforesis en geles ultrafinos de agarosa, que permita separar y cuantificar las proteínas séricas glicosiladas y, de un modo selectivo, la LDL-glicosilada (LDL-glc). (3) Optimizar una técnica para determinar la concentración de lipoperóxidos séricos y de LDL-oxidada (LDL-O). (4) Determinar las concentraciones de proteínas glicosiladas y LDL-glicosilada, lipoperóxidos