Purificación y caracterización de diferentes formas mutantes de la citotoxina alfa-sarcina
- Álvaro Martínez del Pozo Director
Defence university: Universidad Complutense de Madrid
Year of defence: 1997
- Jose Gregorio Gavilanes Franco Chair
- Covadonga Vázquez Estévez Secretary
- Jose Luis Barbero Esteban Committee member
- Mercedes Oñaderra Sanchez Committee member
- Jose Luis Garcia Lopez Committee member
Type: Thesis
Abstract
La alfa-sarcina es una proteína producida por el hongo aspergillus giganteus mdh 18894, perteneciente a un grupo de ribotoxinas fungicas que se caracterizan por su carácter citotoxico, debido a su actividad ribonucleolitica. El cdna de esta proteína se ha clonado en diferentes sistemas de expresión permitiendo la purificación de alfa-sarcina recombinante, estructural y enzimáticamente indistinguible de la fúngica. Este sistema de expresión ha permitido la producción de grandes cantidades de formas marcadas uniforme y selectivamente (tyr y phe) con n15 y c13, aspecto este imprescindible para la resolución de la estructura tridimensional de la proteína. Se han purificado y caracterizado diferentes formas mutantes de la alfa-sarcina, en residuos pertenecientes al centro activo de la proteína. Esto ha podido confirmar la participación de las his50 y 137 en el mantenimiento de la actividad ribonucleolitica de esta proteína inactivante de ribosomas. Por otro lado, mutaciones en la cys76 y 132 implican una mayor dificultad en su purificación y su caracterización sugiere el mantenimiento de su capacidad para interaccionar con bicapas lipídicas.