Purificación de un inhibidor de la (na+/k+) atpasa a partir de hipófisis e hipotálamo

Résumé

En el presente estudio se ha intentado aislar y purificar un inhibidor de la (na+/kt)ATPasa a partir de hipotálamos e hipófisis bovinas hhif). Para ello se ha empleado una técnica de hplc en fase reversa que ha permitido obtener un único pico, en ambos tejidos, que inhibió in vitro el enzima de forma directamente proporcional a la concentración ensayada y al tiempo de incubación. El inhibidor resulto sensible a hidrolisis acida a 110 c, resulto tener un peso molecular interior a las 500 unidades de masa atómica y presento un espectro de absorción con dos máximos a 204 y 274 nm. La inhibición de la actividad (na/k+)ATPasa fue independiente del estado conformacional en el que se encontrara el enzima. Hhif inhibido también la actividad pnffasa del encima, dependiente de k+. A su vez el inhibidor mostro una inhibición no competitiva en relación con el atp y competitiva para la hidrolisis del sustrato con el k+, pero no con el na+. Hhif también inhibio la bomba de na+ en eritrogitos humanos, midiendose esta actividad como transporte de 86 rb+. Esta inhibición fue reversible. Por otra parte hhif inhibio la union de 3h-ouabaina, digitalico exógeno a su receptor especifico en el enzima. Esta inhibición se debió a una disminución de bmax' como pusieron de manifiesto los estudios de scatchard sin afectar significativamente a la kd. Los estudios de desplazamiento del ligando marcado por parte de hhif, pusieron de manifiesto que el efecto sobre la unión del digitaloco no se llevo a cabo directamente sobre el propio receptor. Por ultimo el inhibidor no presento reacción cruzada con anticuerpos antidigoxina.