Aislamiento, purificación y caracterización de endoglucanasa de T. Reesei qm 9414

Resumen

EL HONGO CELULOLITICO TRICHODERMA REESEI FUE CRECIDO EN UN MEDIO DE CULTIVO QUE CONTENIA PAJA DE TRIGO COMO UNICA FUENTE CARBONADA. DEL CALDO OBTENIDO SE AISLO Y PURIFICO A HOMOGENEIDAD UNA ENZIMA QUE RESPONDIA DE LA MAYOR PARTE DE LA ACTIVIDAD ENDOGLUCANASA, DENOMINADA EG IV. EL PROCESO DE PURIFICACION INCLUYO PRECIPITACION SALINA FRACCIONADA, CORMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO A PH 7.0, CROMATOGRAFIA DE PENETRABILIDAD Y NUEVA CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO A PH 4.5. LA CARACTERIZACION ESTRUCTURAL MUESTRA QUE SE TRATA DE UNA GLICOPROTEINA CON UNA ELEVADA PROPORCION DE ESTRUCTURA BETA Y UNA EXIGUA PROPORCION DE HELICE ALFA; LOS PARAMETROS HIDRODINAMICOS DETERMINADOS INFORMAN DE UN ASPECTO ALARGADO PARA LA MOLECULA. ESTA ENZIMA SUFRE INACTIVACION ENTRE 50 Y 70 GRADOS C, SIENDO LA FORMACION DE AGREGADOS EL FENOMENO RESPONSABLE DE DICHA TERMOINACTIVACION; DE ESTE MODO SE SUGIERE EL EMPLEO DE UREA Y UN PROTECTOR DE PUENTES DISULFURO PARA LA UTILIZACION INDUSTRIAL DE LA ENZIMA CON FINES INDUSTRIALES. ASIMISMO ES POSIBLE AISLAR DEL MISMO CALDO UN DOMINIO DE LA ENZIMA SURGIDO POR PROTEOLISIS ESPONTANEA DE LA MISMA; ESTE DOMINIO ES CAPAZ DE HIDROLIZAR SIMULTANEAMENTE DOS MOLECULAS DE SUSTRATO, HACIENDO MAS EFICAZ LA HIDROLISIS DE CELULOSA.