Estudio cinético y físico-químico de las fosforribosil transferasas de bases púricas de artemia

Resumen

SE HAN CARACTERIZADO DOS ACTIVIDADES FOSFORRIBOSIL TRANSFERASAS DE BASES PURICAS EN QUISTES Y NAUPLIAS DE ARTEMIA; UNA ESPECIFICA PARA ADENINA, APRTASA Y OTRA, CON ACTIVIDAD PARA HIPOXANTINA Y GUANINA, HGPRTASA. AMBAS PROTEINAS SE PURIFICAN, HASTA HOMOGENEIDAD, EN UN PASO DE CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD SOBRE AMP-SEPHAROSA. LAS PROPIEDADES FISICO-QUIMICAS Y LAS CONSTANTES CINETICAS Y REGULADORAS DE LAS ENZIMAS, APRTASA Y HGPRTASA, DE QUISTES DE ARTEMIA SON SIMILARES A LAS DE NAUPLIAS. SE HA DETERMINADO POR FILTRACION EN GEL, UN PESO MOLECULAR PARA APRTASA Y HGPRTASA DE 28.000 Y 66.000 DALTONS RESPECTIVAMENTE. EL TAMAÑO DE SUBUNIDAD ES DE 15.000 DALTONS PARA APRTASA Y 19.000 DALTONS PARA HGPRTASA. LAS ENZIMAS MUESTRAN LOS MISMOS REQUERIMIENTOS DE CATIONES DIVALENTES, MG, MN Y/O ZN. LAS CONSTANTES DE AFINIDAD PARA LOS SUSTRATOS SON DEL ORDEN M EN AMBAS ENZIMAS, SIENDO LA HGPRTASA INHIBIDA POR LAS BASES SUSTRATO, HIPOXANTINA Y/O GUANINA, CON VALORES DE KI DE 80 Y 10 M RESPECTIVAMENTE. ESTUDIOS DE INHIBICION POR PRODUCTO, INDICAN QUE EL AMP ES INHIBIDOR COMPETITIVO, CON RESPECTO AL PRPP, EN LA REACCION APRTASA, MIENTRAS QUE LA HGPRTASA MUESTRA INHIBICION MIXTA POR GMP. EN LAS REACCIONES APRTASA Y HGPRTASA SE OBSERVA EN CIERTAS CONDICIONES EXPERIMENTALES DOS FASES DE VELOCIDAD: UNA INICIAL, DENOMINADA SALTO, DESCRITA Y ESTUDIADA, EN LAS FOSFORRIBOSIL TRANSFERASAS DE OTROS SISTEMAS COMO PARTE INHERENTE A LOS MECANISMOS DE LAS REACCIONES, SEGUIDA DE UNA SEGUNDA FASE ESTACIONARIA. NUESTROS RESULTADOS DEMUESTRAN QUE LA FASE INICIAL ES UN ARTEFACTO EXPERIMENTAL DEBIDO A LA INEFECTIVIDAD DE LOS METODOS UTILIZADOS EN LA TERMINACION DE LAS REACCIONES: BUTANOL, CALOR O FRIO. EL SALTO REPRESENTARIA LA CANTIDAD DE PRODUCTO FORMADO DESPUES DE LA, APARENTE, INTERRUPCION DE LA REACCION. LAS ENZIMAS SON RESISTENTES A LA TEMPERATURA, CON PUNTOS DE TRANSICION, SEGUN LOS PLOTS DE ARRHENIUS, DE 70 GRADOS C EN APRTASA Y 60 Y 80 GRADOS C EN HGPRTASA. INTE