Análisis de ácido abscísico por espectrofluorimetríadesarrollo de un método y su aplicación al estudio del contenido endógeno de ácido abscísico en semillas envejecidas de girasol

Resumen

El ácido abscisico es una sustancia de gran importancia como regulador de crecimiento vegetal. En esta memoria se ha desarrollado una metodología basada en el empleo de la espectrofluorimetria como técnica analítica para la determinación cuantitativa de aba. Se trata de una reacción de derivatización en la que una solución acuosa que contiene aba se hace reaccionar con acido sulfúrico concentrado en proporción 1:1 (v/v). La reacción transcurre en baño de agua a ebullición durante 15 minutos, tras lo cual se alcaliniza el medio de reacción, manteniéndose en reposo y en oscuridad durante 30 minutos. Se obtiene así un único máximo de fluorescencia a unas ex/ em de 380 y 465 nm. La señal de fluorescencia así obtenida es lineal, repetitiva y exacta, mientras que su reproducibilidad es baja. Se han considerado las sustancias que podrían interferir en la determinación de aba en nuestro material biológico (semillas de girasol), observándose que la interferencia mas grave se produciría como consecuencia de la presencia en el medio de reacción de los ácidos cafeico y clorogénico. Sin embargo, estos compuestos no superan el proceso de purificación al que se someten los extractos. Asimismo, las cumarinas darían lugar a una interferencia importante en la señal de fluorescencia atribuida al aba. Una vez desarrollado el método analítico, se aplico este a la determinación del contenido de aba en semillas de girasol y al estudio de su evolución durante el envejecimiento acelerado de mismas. Ello puso de manifiesto un primer aumento en sus niveles a tiempos cortos de envejecimiento, seguido por un ligero descenso a tiempos mas largos. Se contrastaron los resultados obtenidos por espectrofluorimetría con los observados por aplicación de otra metodología analítica ya descrita en la bibliografía, para lo que se escogió un método basado en el empleo de hplc-uv. La aplicación del hplc-uv al estudio de la evolución de los niveles de aba durante e