Caracterización de un gen especifico de esporulación capaz de complementar una mutación que determina fenotipo auto lítico en ciclo mitótico de saccharomyces cerevisiae

Resumen

EL MUTANTE L2 DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE, PORTADOR DE LA MUTACION LYT1-1, QUE AFECTA A UN SOLO GEN, LYT1, SUFRE AUTOLISIS A LA TEMPERATURA NO PERMISIVA DE 37C, DURANTE EL CICLO MITOTICO. TAMBIEN TIENE AFECTADA LA CAPACIDAD DE ESPORULACION, TANTO A 24, COMO A 37C. LA MUTACION LYT1-1 ES RECESIVA EN CUANTO AL CICLO MITOTICO, PERO PARECE DOMINANTE EN CUANTO A LA ESPORULACION. LA LISIS SE PRODUCE SIEMPRE EN EL MISMO PUNTO DEL CICLO MITOTICO, EN UN PUNTO POSTERIOR AL INICIO DE LA SINTESIS DEL DNA. UTILIZANDO UNA GENOTECA GENOMICA DE S. CEREVISIAE LIGADA AL VECTOR Y EP13, CLONAMOS UN FRAGMENTO DE 5,5 KB. QUE COMPLEMENTA, EN MULTICOPIA, EL FENOTIPO AUTOLITICO EN CICLO MITOTICO, PERO NO RESTAURA LA CAPACIDAD DE ESPORULAR. EL ANALISIS DE LA SECUENCIA NUCLEOTIDICA DEL MINIMO FRAGMENTO CAPAZ DE COMPLEMENTAR, PUSO DE MANIFIESTO LA EXISTENCIA DE DOS MARCOS ABIERTOS DE LECTURA, CORRESPONDIENTES A LOS GENES SPO12 Y SPO16, SIENDO EL PRIMERO EL RESPONSABLE DE LA COMPLEMENTACION DEL FENOTIPO. EXPERIMENTOS DE DISRUPCION GENICA Y ANALISIS DE LA SEGREGACION DEL FENOTIPO AUTOLITICO, HAN PERMITIDO CONCLUIR QUE EL GEN SPO12 ACTUA POR UN MECANISMO DE SUPRESION EXTRAGENICA. EL GEN SPO12 NO SE EXPRESA EN CICLO MITOTICO, Y SU DISRUPCION NO PARECE AFECTAR AL CRECIMIENTO DE LA CEPA A NINGUNA TEMPERATURA. EL PRODUCTO DEL GEN SPO12 TIENE UN PUNTO ISOELECTRICO EXTREMADAMENTE BASICO, Y UNA COLA ACIDA EN SU EXTREMO CARBOXILO, QUE NO ES NECESARIA PARA LA COMPLEMENTACION DEL FENOTIPO.