Caracterización molecular de mutantes defectivos en la expresión de hla-dp y estudio de determinantes implicados en el reconocimiento serológico de este antígeno

Résumé

En el presente trabajo se han caracterizado una serie de lcls mutantes defectivas en la expresión de hla-dp, generadas con icr-191 y seleccionadas posteriormente por su resistencia a la lisis mediada por ctls dpw2 aloespecificas. Utilizando ctls especificas para distintos alelos y loci de hla, se ha localizado el defecto de estos mutantes específicamente en hla-dpw2. Se han llevado también a cabo estudios de expresión de rnam de y de hla-dp en estos mutantes. Se ha identificado el defecto molecular responsable del fenotipo del mutante 45em19 mediante la clonación y posterior secuenciación de los genes alfa y beta de hla-dp en este mutante, localizándose el defecto responsable de la falta de expresión de hla-dp a nivel de la secuencia nucleotidica de hla-dp. Por otro lado, se han llevado a cabo estudios de epítopos de hla-dp implicados en el reconocimiento de este antígeno. Para ello se han generado varios "mutantes dirigidos" de hla-dpb1-02012 y mediante estudios de inmunofluorescencia indirecta y citometría de flujo utilizando anticuerpos monoclonales hla-dp específicos y transfectantes de estos genes silvestres y mutados, se ha localizado el residuo k-69 como un residuo importante en la formación de estos epítopos.