Evolución y diseminación del transposon tn5. Estudios moleculares sobre las resistencias a aminoglicósidos codificadas en su región central

Resumen

EL TRANSPOSON TN5 CONTIENE, EN SU REGION CENTRAL, 3 GENES (APHA-2, ELE Y STR) CUYOS PRODUCTOS CONFIEREN RESISTENCIA A KANAMICINA, BLEOMICINA Y ESTREPTOMICINA (SM) RESPECTIVAMENTE. EL GEN STR CODIFICA PARA UNA FOSFOTRANSFERASA NO ACTIVA EN ENTEROBACTERIACEAE. UNA CEPA CLINICA DE E. COLI, POSEEDORA DE UN PLASMIDO CONJUGATIVO, PORTADOR DE UNA NUEVA ESPECIE MOLECULAR DE TN5 CAPAZ DE CONFERIR RESISTENCIA A SM (EL TN5-RC), FUE AISLADA EN EL HOSPITAL RAMON Y CAJAL. EL TN5 RC Y EL PLASMIDO FUERON OBJETO DE ESTUDIO. LA RESISTENCIA A SM ERA DEBIDA A UNA DELECION DE 6 PARES DE BASES EN EL EXTREMO 3' DEL GEN STR DEL CITADO TRANSPOSON. EL ESTUDIO DEL PLASMIDO MOSTRO QUE ESTE PRESENTABA UNA GRAN HOMOLOGIA CON EL PLASMIDO PJR67 (PORTADOR DEL TN5 ORIGINAL AISLADO EN EEUU EN 1975 DE UNA CEPA DE KLEBSIELLA). EL AISLAMIENTO Y CARACTERIZACION DE NUEVOS PLASMIDOS PORTADORES DE TN5, DE DIVERSOS ORIGENES (HOSPITALARIO Y AGUAS RESIDUALES), REVELA UNA AMPLIA DISEMINACION DEL TRANSPOSON EN CUANTO A ESPECIES BACTERIANAS PERO UNA ESTRECHA DISTRIBUCION DEL MISMO EN CUANTO A PLASMIDOS PORTADORES (LA GRAN MAYORIA PERTENECEN AL GRUPO DE INCOMPATIBILIDAD INC I). LA COMPARACION DE LOS PLASMIDOS ENTRE SI (FRAGMENTOS DE RESTRICCION Y FENOTIPOS) MEDIANTE SONDAS DE DNA DE DIVERSOS ORIGENES CONDUCE A LA ELABORACION DE ARBOL FILOGENETICO QUE RELACIONA ESTRECHAMENTE LOS PLASMIDOS E INDICA LOS EVENTOS EVOLUTIVOS QUE CONDUJERON A LA DIFERENCIACION DE DICHOS PLASMIDOS A PARTIR DE UN ANCESTRO COMUN. EL ESTUDIO DE LA RELACION ESTRUCTURA-FUNCION DEL PRODUCTO DEL GEN APHA-2, LA FOSFOTRANSFERASA APH(3')II, MEDIANTE MUTAGENESIS (AL AZAR Y DIRIGIDA) REVELA QUE EXISTEN 3 REGIONES DE IMPORTANCIA EN EL CITADO ENZIMA (DICHAS REGIONES COINCIDEN CON 3 ZONAS ALTAMENTE CONSERVADAS EN LAS SECUENCIAS DE LAS 7 APH(3') CONOCIDAS). MEDIANTE PURIFICACION PARCIAL (FPLC) Y ESTUDIOS CINETICOS SE ASIGNA A UNA DE LAS ZONAS LA FUNCION DE INTERACCION CON EL AMINOGLICOSIDO.