Purificación de las proteínas mayoritarias de la mielina de cerebro bovino por métodos no desnaturalizantes

Zusammenfassung

La investigación a nivel molecular de la membrana mielinica se ha centrado en nuestro laboratorio en las proteínas denominadas proteolípido de mielina y proteína básica. Ninguna de estas proteínas tiene actividad biológica, por lo que el estudio de la interacción de estos componentes y la regulación o modulación de sus funciones tiene una dificultad a veces insalvable. Precisamente este hecho ha ocasionado que nosotros nos planteemos como primer objetivo el descubrimiento de una transición térmica que, debidamente seguida por microcalorimetria diferencial de barrido, pudiese servir como marcador conformacional para detectar si la mielina y algunas de sus proteínas estaba o no desnaturalizada en una condición experimental dada. Dicha transición ha permitido buscar procedimientos alternativos a los ya publicados, de purificación de estas proteínas y al menos en el caso del proteolípido se sabe que evitan condiciones desnaturalizantes. Este hecho ha sido comprobado experimentalmente ya que ha sido posible recuperar, después del proceso de purificación, casi todas las características termodinámicas de la transición presente en la membrana original. Respecto a la proteína básica, debido a la experiencia obtenida con el proteolípido se pensó que convendría utilizar una estrategia análoga para purificarla. Se ha encontrado un método que tiene rendimientos análogos a los de la bibliografía y que según nuestro criterio, compartido por otros autores, evita condiciones potencialmente desnaturalizantes. Sobre su conformación "nativa" poco podemos decir ahora, porque no disponemos por el momento de otro marcador conformacional.