Análisis de las secuencias de dna localizadas en promotores con capacidad de conferir expresión inducible por la luz en plantas de nicotiana plumbaginifolia

Résumé

El trabajo que constituye la presente tesis doctoral se ha centrado en el análisis de las secuencias de dna de la región 5' no codificadora del gen cab-e de plantas de nicotiana plumbaginifolia, involucradas en la fotorregulación de la expresión de este gen. Para ello, se han preparado diferentes series de delecciones 5' terminales e internas del promotor, así como distintos promotores quiméricos que se han introducido en plantas de n. Tabacum mediante transformación con agrobacterium. El estudio realizado ha permitido demostrar que las secuencias reguladoras que controlan la expresión del gen cab-e se encuentran localizadas, dentro de la región 5' no codificadora, en un fragmento de dna que se extiende, aproximadamente, 1500 pb. A partir del sitio de iniciación de la transcripción. Dichas secuencias confieren altos niveles de expresión inducible por la luz al gen bacteriano cat en plantas transgenicas de tabaco. A lo largo de la mencionada región se han caracterizado dos elementos, designados erp1 y erp2, situados respectivamente a 1,5 y 0,7 kb. De la región codificadora del gen, que actúan como elementos reguladores positivos y su presencia es necesaria para conseguir los máximos niveles de expresión. Ambos elementos presentan secuencias repetidas homologas al dodecamero accgcccactt responsables de la función atribuida a dichos elementos. Entre estos dos elementos positivos existe una región en la que se localizan secuencias que actúan como elemento regulador negativo, reduciendo los niveles de expresión conferidos por el promotor en presencia de la luz. Extendiéndose entre las posiciones -516 y -234 existe un tercer elemento positivo, erp3, cuya presencia es imprescindible para la funcionalidad del promotor. El análisis de la expresión obtenida con los elementos ern, erp2 y erp3 fusionados al promotor heterolgo 35s pone de manifiesto que los promotores quiméricos originados presentan la capacidad de conferir al gen cat u