Toxoplasmosis y neosporosis en rumiantes domésticosnormalización de modelos animales y evaluación de nuevos fármacos

Resumen

Toxoplasma gondii y Neospora caninum son parásitos apicomplejos considerados como unas de las principales causas de aborto transmisible en el ganado ovino y caprino y en el ganado bovino, respectivamente. En estas enfermedades, los modelos de infección en las especies de destino no están normalizados. Por otro lado, actualmente no hay fármacos seguros y eficaces para el tratamiento de estas enfermedades en los rumiantes y existen nuevas dianas terapéuticas como la proteína quinasa dependiente de calcio tipo 1 CDPK1 frente a la que se ha diseñado un grupo de fármacos conocidos como Bumped Kinase Inhibitors BKIs . El objetivo general de la tesis doctoral fue, por un lado, normalizar un modelo ovino gestante de infección por cada uno de estos protozoos, comparando los resultados con los obtenidos para aislados tipo II en el modelo murino caso de T. gondii o realizando una titulación de la dosis infectante caso de N. caninum. Por otro lado evaluó la seguridad y la eficacia frente a la infección congénen dichos modelos de BKIs candidatos. Tradicionalmente se ha utilizado el modelo murino para el estudio de la toxoplasmosis. Estudios recientes han demostrado que la respuesta inmunitaria difiere entre el ratón, que presenta una activación de los Toll-Like Receptors TLR 11/12 que da lugar la producción de interferón gamma y por consiguiente a una activación del sistema de las immunity-related GTPases IRGs , y la oveja y el hombre que no presentan dicho mecanismo de defensa frente a la infección por T. gondii. En esta tesis doctoral se ha demostrado que la infección congénita con el aislado TgShSp1 de T. gondii fue diferente en ratón y en oveja, observándose menores mortalidad de las crías y transmisión vertical en el primero. Este resultado permite concluir que la virulencia en ratón de los aislados tipo II de T. gondii no es un buen indicador de las consecuencias de la toxoplasmosis en oveja gestante. En el caso de la neosporosis, el modelo ovino podría ser un buen sustituto del modelo bovino que presenta un mayor coste, mayor dificultad de manejo y gestación más prolongada. Sin embargo, la influencia de la dosis infectante y la ruta de administración apenas se han estudiado. En esta tesis se ha demostrado que la infección por vía intravenosa con 10E5 taquizoítos del aislado Nc-Spain7 a mitad de la gestación produce aborto en todas las ovejas y una transmisión vertical similar a la dosis utilizada hasta el momento en estudios previos infección con 10E6 taquizoítos . Las ovejas gestantes desafiadas a mitad de la gestación por vía subcutánea con 10E4 taquizoítos no mostraron diferencias en mortalidad fetal ni en la trasmisión vertical respecto a las ovejas desafiadas por vía intravenosa con la misma dosis. Por ello, se propone el uso de un modelo basado en la inoculación de 10E5 taquizoítos por vía intravenosa al tratarse de la dosis menor en la cual se observa 100% de mortalidad perinatal. Los fármacos probados hasta el momento frente a T. gondii y N. caninum en rumiantes han mostrado escasa eficacia tal y como se recoge en la revisión bibliográfica de esta tesis doctoral. Los BKIs han mostrado resultados prometedores in vitro y en modelos murinos. En este trabajo, tanto el BKI-1294 como el BKI-1553 han demostrado su seguridad. La administración de BKI-1294 a ovejas infectadas por T. gondii evitó la mortalidad de hasta 76 por ciento de los fetos y el tratamiento con BKI-1553 protegió del aborto al 50 por ciento de las ovejas infectadas por N. caninum. En relación a la transmisión vertical, mientras que el BKI-1553 no evitó la transmisión vertical de N. caninum, aunque redujo parcialmente los efectos de la infección disminuyendo las lesiones y la presencia y carga del parásito en cerebro fetal, el BKI-1294 evitó la transmisión vertical de T. gondii hasta en el 53 por ciento de los corderos.