Caracterización de la proteína recombinante rHc23 y mejora de su capacidad inmunizante frente a la hemoncosis ovina

Resumen

La hemoncosis ovina es una enfermedad parasitaria de distribución mundial causada por el nematodo gástrico Haemonchus contortus. La patogenia de esta parasitosis se relaciona con la hematofagia de adultos y preadultos del helminto. La enfermedad es responsable de importantes pérdidas económicas debido a la disminución de la producción y calidad de carne, leche y lana en los animales adultos, así como la muerte de los corderos más afectados. Su control se ha basado esencialmente en el uso de antihelmínticos. No obstante, el aumento de las resistencias frente a estos fármacos, la falta de nuevos antiparasitarios y la creciente preocupación social en la agricultura sostenible, han provocado interés en el desarrollo de sistemas alternativos de control tales como la inmunoprofilaxis. Los estudios en el ganado ovino están limitados por su coste y el desconocimiento de muchos aspectos de su sistema inmunitario, por lo que el empleo de modelos subrogados de laboratorio sería relevante. Se ha logrado la vacunación de corderos frente a la hemoncosis con algunos antígenos purificados del helminto. Sin embargo, las formas recombinantes homólogas no han producido, en general, resultados comparables. La proteína recombinante rHc23, desarrollada a partir de un antígeno de adultos de H.contortus, ha sido una excepción ya que ha logrado niveles significativos de protección en corderos. Teniendo en cuenta esta situación se ha estudiado, en modelo murino BALB/c, la inmunomodulación inducida por un adyuvante bacteriano formado por lipopolisacárido de Escherichia coli y Propionibacterium acnés, en infestaciones por Heligmosomoides polygyrus y su posible aplicación al sistema H.contortus cordero. Asimismo, en este mismo modelo, se ha determinado el efecto de una infección intercurrente por Leishmania infantum. Se ha profundizado en la caracterización de Hc23 y la forma recombinante rHc23 mediante purificación, secuenciación múltiple y estudio cristalográfico preliminar. Se ha valorado la capacidad inmunoprotectora de rHc23 con distintos adyuvantes, hidróxido de aluminio y QuilA, y dosis de antígeno, 50 y 200 microgramos de rHc23 por dosis, en infestaciones únicas por H.contortus. Finalmente, y con objeto de reproducir las infestaciones naturales, se ha determinado la capacidad protectora de la vacunación con rHc23 y el inmunomodulador bacteriano en infestaciones seriadas, 3 veces por semana, 2 semanas, con dos niveles de infestación, 1.000 L3 y 2.000 L3. Se ha demostrado el papel protector del inmunomodulador bacteriano en el modelo H.polygyrus ratón, con menor eliminación de huevos, retraso en el desarrollo larvario en la mucosa y una recuperación de la inmunosupresión temprana inducida por el helminto. La infección por L.infantum de ratones infestados por H.polygyrus provocó un agravamiento de la helmintosis, con mayor eliminación de huevos, superior carga parasitaria y longevidad de los helmintos. La inmunosupresión inducida por el protista, en animales coinfectados, sugiere la modulación de la respuesta protectora frente al helminto, Th2 a Th1. La caracterización de Hc23 y rHc23 ha confirmado su homología, ausencia de contaminación y presencia de isoformas de la proteína, así como su posible dimerización espontánea. Los resultados obtenidos en los ensayos de vacunación en corderos confirman el interés de rHc23 como candidato para la vacunación frente a la hemoncosis, con una elevada reducción de los principales parámetros parasitológicos en las condiciones ensayadas, dosis única y dosis múltiples, así como el superior valor del hidróxido de aluminio como adyuvante. Los mecanismos efectores de esta protección no son conocidos en este momento y en las condiciones ensayadas no se ha observado ningún papel protector aparente de los anticuerpos IgG1 frente a estas infestaciones H.contortus y H.polygyrus. Por otra parte, los resultados obtenidos en el modelo subrogado no permiten una traslación directa a la hemoncosis.