Diferencias en la expresión de mediadores inflamatorios, niveles de glicocálix y perfiles de microrna en páncreas humanos de donantes en parada cardiaca no controlada y donantes en muerte encefálica

Resum

Introducción. La diabetes mellitus tiene importantes implicaciones a nivel médico y socioeconómico. Las limitaciones en su tratamiento impulsan el desarrollo de terapias orientadas a la curación de la misma. El trasplante de páncreas, tanto completo como de islotes, representa una alternativa al abordaje con insulina. Sin embargo, la escasa disponibilidad de órganos susceptibles de donación en muerte encefálica (brain-dead donation; BDD) limita su aplicabilidad. Así, la donación en parada cardiaca no controlada (uncontrolled non-heart-beating donation; UNHBD) se ha postulado como una alternativa válida. No obstante, poco se conoce sobre el estado tisular real de los órganos así obtenidos. La UNHBD se realiza bajo condiciones desfavorables e implica una exposición de los injertos a estímulos dañinos desencadenantes de respuestas inflamatorias, estrés oxidativo y fenómenos de apoptosis. Esto explicaría las tasas mayores de disfunción primaria del injerto tradicionalmente observadas en la UNHBD. Hipótesis. Existen diferencias en la expresión de los marcadores biomoleculares del estado tisular en los páncreas humanos obtenidos de la UNHBD, en comparación con los obtenidos de la BDD, considerada de referencia. La investigación acerca de tales diferencias avalaría la viabilidad de los páncreas de la UNHBD, y en consecuencia su utilización a nivel clínico. Objetivos. Objetivo general. Evaluar a nivel biomolecular la viabilidad de los páncreas humanos obtenidos de la UNHBD frente a los obtenidos de la BDD. Objetivos específicos. Evaluar la expresión diferencial en las biopsias de páncreas obtenidos de UNHBD y BDD, de: mediadores inflamatorios, marcadores de estrés oxidativo, marcadores de apoptosis, perfiles de miRNAs, y componentes del glicocálix. Material y Métodos. Se reclutaron 56 pacientes, 48 UNHBDs y 18 BDDs, del Hospital Clínico San Carlos. Las biopsias de tejido pancreático fueron analizadas en el Dpto. de Bioquímica y Biología Molecular III de la Facultad de Medicina de la Universidad Complutense de Madrid. Análisis bioquímico. Se determinó la expresión de mRNA (de IL-1¿, TNF-¿, IL-6, IL-10, eNOS, iNOS, HO-1, HO-2, Bax y Bcl-2) y de miRNAs (miR 16, miR 21, miR 103, miR 107, miR 126, miR 142-5p, miR 145, miR 146, miR 152, miR 155, miR 182, miR 92, miR 223 y Let-7) mediante qRT-PCR. La expresión de proteínas (de IL-1¿, TNF-¿, eNOS, iNOS, HO-1, HO-2, SYND1 y HS) se determinó mediante Western Blotting. La actividad de enzimas antioxidantes (CAT, GR, GPx) se determinó mediante kits comerciales específicos; y los niveles de 8-OHG, mediante ELISA. Análisis estadístico. Para identificar diferencias entre ambos grupos de donantes, se empleó el test U de Mann-Whitney. Se consideró significativo un intervalo de confianza del 95%. Los resultados se expresan como media ± error estándar de la media (EEM). Resultados. Los UNHBDs mostraron una expresión similar (IL-10) o menor (IL-1¿, TNF-¿ e IL-6) de mediadores de la inflamación. La expresión de marcadores de estrés oxidativo y de apoptosis fue semejante en ambos tipos de donantes (CAT, GR y GPx; Bax y Bcl-2), o incluso menor en los UNHBDs (8-OHG). Se observaron diferencias en la expresión de mRNA y de proteínas de las isoformas enzimáticas de NOS y de HO. Se objetivó un descenso de algunos miRNAs (miR 103, miR 126 y miR 152) y un incremento de otros (Let-7, miR 16, miR 145, miR 182 y miR 192) en los UNHBDs, y una expresión similar de otros (miR 21, miR 107, miR 142-5p, miR 146, miR 155 y miR223) en ambos tipos de donantes. Aunque la expresión de HS fue semejante, la de SYND1 fue mayor en los UNHBDs. Conclusiones. Estos resultados sugieren que el daño pancreático generado durante la UNHBD es asumible. Aunque serían necesarios estudios adicionales para esclarecer sus consecuencias clínicas, estos hallazgos refuerzan el papel de los UNHBDs como alternativa para aumentar el n