Expresión y estudio de enzimas termoestables de interés biotecnológico

Resumo

El género Thermus ha llegado a ser uno de los modelos de bacterias termófilas más utilizados en el laboratorio debido a su fácil manipulación, la capacidad de crecer hasta altas densidades ópticas en condiciones aeróbicas y su competencia natural. Este género, continúa siendo una fuente de enzimas termófilas de gran interés biotecnológico y, más recientemente, gracias al desarrollo de nuevos plásmidos y marcadores termoestables de selección por antibióticos, una herramienta para la sobreexpresión de enzimas termófilas y para la selección, por evolución dirigida, de mutantes termoestables de proteínas mesófilas. El objetivo principal de esta tesis es la búsqueda de enzimas biotecnológicamente relevantes en el genoma de Thermus thermophilus HB27. Escogimos 9 genes codificantes de hipotéticas glicosidasas y 5 de lipasas/esterasas. Clonamos estos genes en E. coli y tratamos de sobreexpresar y purificar las correspondientes proteínas. Por otro lado, probamos la viabilidad de sistemas de expresión alternativos como Streptomyces lividans y Thermus thermophilus.%&/Hemos identificado el gen TTP0042 como el responsable del incremento en las actividades -galactosidasa y -fucosidasa observadas cultivos de Thermus thermophilus HB27 crecidos en medios con limitación de nutrientes suplementados con celobiosa. Este gen pertenece a un operón que codifica homólogos de proteínas implicadas en la detección y el transporte de glicósidos. Se ha estudiado la regulación de este operón, identificando el promotor principal del mismo y confirmando su unión a la proteína TTP0038, un homólogo de LacI, probablemente implicado en esta regulación.%&/En el último capítulo de esta tesis analizamos un gen codificante de una posible penicilín acilasa de Thermus thermophilus HB27, su expresión, maduración y actividad.