Desarrollo de una plataforma para la selección de anticuerpos recombinantes humanos basada en la activación de linfocitos Testrategias de selección in vitro e in vivo

Résumé

DESARROLLO DE UNA PLATAFORMA PARA LA SELECCIÓN DE ANTICUERPOS RECOMBINANTES HUMANOS BASADA EN LA ACTIVACIÓN DE LINFOCITOS T. ESTRATEGIAS DE SELECCIÓN IN VITRO E IN VIVO. En este trabajo se describe el diseño y validación de una plataforma de exposición de proteínas en la superficie de linfocitos T. La exposición de anticuerpos en la superficie de linfocitos T como parte de un receptor de antígeno quimérico (CAR) capaz de activar la célula T, es un sistema ideal para demostrar la interacción entre un antígeno y un anticuerpo, a través de la detección de cambios fenotípicos en la célula T, como es la expresión del marcador de activación CD69. Para validar la plataforma, una línea de células T humana fue transducida con un vector lentiviral que contenía la secuencia codificante de un CAR antitumoral frente al antígeno carcinoembrionario. Tras la interacción entre el CAR y el antígeno tumoral, se demostró que es posible activar y seleccionar mediante citometría de flujo separadora, las células T que expresaban el CAR antitumoral en base a la expresión de CD69 y EGFP. La exposición de un repertorio genético de anticuerpos en la superficie de células T en el contexto de un CAR, nos permitió seleccionar in vitro anticuerpos anti-tumorales. Esta plataforma, pude ser utilizada in vivo para la selección de anticuerpos frente a antígenos de diferentes tejidos tras la extravasación, retención y activación de las células con un CAR específico frente a tales antígenos. Se generó un modelo animal de vasculatura tumoral humana que pueda servir para el estudio de los aspectos moleculares del proceso angiogénico, así como para la evaluación de nuevos anticuerpos antiangiogénicos y antitumorales que podrían ser seleccionados mediante la plataforma de exposición de repertorios en linfocitos T desarrollada.