Caracterización molecular del canal de calcio del subtipo P/Q y su interacción con SNAP-25

Abstract

Los canales de Ca2+ de los subtipos P y Q, expresados por las neuronas de Purkinje y granulares, son proteínas heteroméricas constituídas por una subunidad principal alpha-1A, codificada por un único gen, y por varias subunidades auxiliares. A pesar de la similitud estructural, las corrientes P y Q difieren biofísica y farmacológicamente. No se conocen las bases moleculares de estas diferencias, pero es posible que cada canal pudiera estar formado por una isoforma distinta de la subunidad alpha-1A, y/o por una clase diferente de subunidad beta. Las células cromafines de la médula adrenal son un buen modelo para abordar esta cuestión ya que expresan ambos subtipos de canales, de acuerdo a datos electrofisiológicos y farmacológicos previos. En el presente estudio se ha identificado el cDNA de la subunidad alpha-1A expresada por las células cromafines. Ésta contiene 7.458 pb que codifican para una proteína de 2485 aminoácidos. Los cuatro dominios I-IV de la subunidad alpha-1A bovina están muy conservados respecto a la misma proteína clonada en conejo, rata, ratón y humano. Sin embargo, la proteína bovina difiere significativamente de las tres primeras especies en el segundo bucle intracelular entre los dominios II-III (LII-III) y en la región C-terminal. Por el contrario, estas dos regiones de la proteína bovina y humana presentan una elevada homología (96%). Nuestros datos también indican que las células cromafines expresan varias isoformas de la subunidad alpha-1A, incluyendo las variantes "larga" y "corta" del extremo C-terminal previamente identificadas en cerebro humano. Producidas por procesamiento alternativo del gen bovino, el mRNA de la isoforma "larga" contiene una inserción de 5 pb (GGCAG) antes del codon de parada, extendiendo en 703 nucleótidos el marco de lectura en el extremo 3' de la isoforma "corta". Curiosamente, en el extremo C-terminal de la isoforma "larga" bovina, al igual que en la humana, exi