Infección de células oligodendrocíticas con el virus Herpes simplex tipo 1 efecto sobre el proteolípido MAL2

Resumen

ÍNDICE Pág. SUMMARY iii ABREVIATURAS vii 1. INTRODUCCIÓN 1-28 1.1. BIOLOGIA DE LOS OLIGODENDROCITOS 3 1.1.1. Células gliales del sistema nervioso central 3 1.1.2. Oligodendrocitos 2 1.1.3. Estructura y composición de la mielina 5 1.1.4. Desarrollo de oligodendrocitos 7 1.2. VIRUS Y DESMIELINIZACION 12 1.2.1. Enfermedades desmielinizantes 12 1.2.2. Esclerosis múltiple 13 1.2.3. Implicación viral en EM 15 1.2.4. El virus Herpes Simplex tipo 1 16 1.3. LA FAMILIA MAL DE PROTEOLÍPIDOS 23 1.3.1. Balsas lipídicas (lipid rafts) 23 1.3.2. La familia MAL 24 1.3.3. La proteína MAL2 25 1.3.4. Endosomas de reciclaje 27 1.3.5. Polarización de OLs 28 2. OBJETIVOS 31 3. MATERIALES Y MÉTODOS 33-44 3.1. MATERIALES 35 3.1.1. Anticuerpos y reactivos 35 3.1.2. Líneas celulares 36 3.1.3. Cepas víricas 36 3.2. MÉTODOS 37 3.2.1. Obtención y conservación del stock vírico 37 3.2.2. Transfección transitoria 37 3.2.3. Transfección estable 38 3.2.4. Aislamiento de rafts con detergentes 38 3.2.5. Análisis mediante inmunotransferencia 38 3.2.6. Inmunofluorescencia 39 3.2.7. Citometría de flujo 40 3.2.8. Ensayos de transcitosis 40 3.2.9. Infección de las líneas oligodendrocíticas 41 3.2.10. Titulación de virus 41 3.2.11. Valoración de la síntesis de proteinas con 35S-metionina 42 3.2.12. Microscopía electrónica 43 4. RESULTADOS 45-89 4.1. Crecimiento y diferenciación de las líneas celulares 47 4.2. Estudio de MAL2 en células Oli-neu 49 4.2.1. Expresión de MAL2 y asociación a rafts en células Oli-neu 49 4.2.2. Caracterización del compartimento positivo para MAL2 en células Oli-neu 52 4.3. Estudio de MAL2 en células oligodendrocíticas humanas 54 4.3.1. Transfección estable de líneas oligodendrocíticas 55 4.3.2. Caracterización del CPM2 en HOG 57 4.3.3. Ensayos de transcitosis 63 4.3.4. Estudio de la polarización celular 70 4.3.5. Exosomas 72 4.4. Infección de OLs con HSV-1: estudios preliminares con la línea celular KG-1C 74 4.5. Infección de las líneas Oli-neu y HOG 77 4.5.1. Efecto de la infección sobre MAL2 80 4.5.2. Estudio de la entrada viral 84 5. DISCUSIÓN 91-110 5.1. Infección de OLs con HSV-1: estudios preliminares 93 5.2. Caracterización de MAL2 en células oligodendrocíticas 96 5.2.1. Expresión de MAL2 y asociación a rafts 96 5.2.2. Características del CPM2 98 5.2.3. Ensayos de transcitosis 86 5.2.4. Exosomas 101 5.3. Infección de células Oli-neu y HOG con HSV-1 102 5.3.1. Efecto de la diferenciación celular 102 5.3.2. Entrada viral 103 5.3.3. Relación del virus con MAL2 y el CPM2 104 5.4. Sistemas celulares 105 6. CONCLUSIONES 109 7. REFERENCIAS 113 8. ANEXOS 124