Detección de Mycobacterium tuberculosis en estado de la latencia en muestras clínicas

Resumen

La tuberculosis se considera una de las enfermedades infecciosas cuya patología es más compleja. Probablemente debido a la larga trayectoria del bacilo junto al ser humano. Según datos de la OMS se calcula que en el mundo están infectados por Mycobacterium tuberculosis un tercio la población mundial, lo que representa unos 2.000 millones de habitantes. La existencia de infección sin signos ni síntomas de enfermedad es la situación predominante. Es un estado reversible de actividad metabólica baja, inducido por la falta de nutrientes, las bajas temperaturas, un pH ácido o la falta de oxígeno. Son bacilos viables que pueden resucitar si se dan las condiciones apropiadas. No forman colonias in vitro. Constituyen un reservorio natural del bacilo. La sitación biológica de los bacilos en estado de latencia es poco conocida: su metabolismo, mecanismos genéticos o su localización. Se ha aceptado que establecen latencia en el tejido pulmonar en granulomas. Estudios recientes han indicado que se puede detectar DNA bacteriano en tejidos no granulomatosos tanto de origen pulmonar como extrapulmonar. El diagnóstico de la infección tuberculosa actualmente se realiza mediante la prueba de Mantoux. En este trabajo realizamos un aislamiento de Ácidos Nucleicos en 104 muestras clínicas, tanto pulmonares como extrapulmonares que recogimos de dos hospitales. Posteriormente se realizó un estudio de las muestras mediante la técnica de PCR (Reacción en cadena de la Polimerasa) en tiempo real. La PCR se basa en la amplificación enzimática selectiva de secuencias de DNA que se encuentran en poca cantidad produciendo grandes cantidades de DNA de longitud y secuencia definida. Primeramente se realizó PCR de DNA para b-globina e IS6110. A continuación se realizó PCR en tiempo real de cDNA (tras retrotranscripción del RNA) de las dianas: ftsZ, PCL1, 16S y hspX. Se analizaron también las Historias Clínicas de los pacientes de los que procedían las muestras y los resultados de los laboratorios de Microbiología y Anatomía Patológica. Muestras con resultado positivo para cada diana. Se indica el valor porcentual que representa entre paréntesis. Según los datos obtenidos, en la población estudiada se ha detectado M. tuberculosis en el 28,6% de la misma. Este valor está de acuerdo con los datos que se aceptan respecto a la incidencia de la infección latente por M. tuberculosis por la OMS, que se han determinado por la reacción intradérmica de Mantoux. La diana que más frecuentemente se detecta es el rRNA 16S, como era de esperar en relación con su abundancia en las células. Destaca la abundancia en la detección de la diana ftsZ en muestras cultivo positivo. La diana hspX es la menos frecuente en nuestro estudio. Respecto a la diana PCL1, su frecuencia en muestras con cultivo positivo indica que la célula está activamente sintetizando rRNA 16S, prácticamente en el mismo nivel en que se está usando.