Aplicación de la citometría de flujo a la caracterización y análisis de la viabilidad de las células cromafines de la médula adrenal

Resumen

Se trata del primer estudio con citometría de flujo de caracterización y análisis de la viabilidad de las células cromafines de la médula adrenal bovina. El análisis citométrico del marcaja mediante inmunoflurescencia indirecta de las enzimas DBH y PNMT permitió la distinción de poblaciones de células cromafines adrenérgicas y noradrenérgicas. La estabilidad de las señales asociadas a estos marcadores a lo largo de una semana de cultivo, posibilitará la utilización de la citometría de flujo en el estudio de los cambios fenotípicos inducidos por factores tróficos en subpoblaciones identificadas de células cromafines bovinas. El atrapamiento de fluoresceína evaluando mediante citometría de flujo se reveló como un método objetivo, rápido y muy sensible para la determinación de la viabilidad de las células cromafines. Complementando con el análisis de la distribución celular del contenido de ADN tras el marcaje con yoduro de propidio, y la detección de la translocación de la fosfatidilserina mediante tinción con anexina V-FITC, ha permitido el estudio de los mecanismos de muerte de estas células. Las células cromafines bovinas experimentan un proceso de apoptosis espontánea, progresivo con los días de cultivo. Sin embargo, el tratamiento con fármacos como la veratridina, que produce una sobrecarga citosólica de calcio, o la 6-hidroxidopamina, que genera radicales libres de oxígeno, produce la muerte de las células cromafines por un mecanismo necrótico. Es interesante señalar, que la 2-cloro-2'-deoxiadenosina (cladibrina), un nucleósido que parece comportarse con un antimetabolito, y la deprivación de suero del medio de cultivo no afectaron la supervivencia de las células cromafines, a pesar de inducir la muerte celular por apoptosis en las células CP12, derivadas del feocromocitoma -tumor del tejido cormafín- de rata. Finalmente, se han evaluado los efectos de la dotaricina, un