Efecto de la preservación en frío sobre el rechazo crónico en el modelo de trasplante de extremidad posterior en ratas

Resumen

INTRODUCCIÓN El rechazo crónico (RC) está descrito en trasplante de órgano sólido, siendo la causa más prevalente de fracaso tardío de un órgano trasplantado. En 2009 se produjo el primer caso de RC en un trasplante de tejidos compuestos (TTC), un trasplante de mano realizado en Louisville en 2008 que requirió la amputación del aloinjerto. Estudios clínicos y experimentales han demostrado que la isquemia fría pretrasplante o preservación en hipotermia, estimula el desarrollo de la vasculopatía crónica del aloinjerto (VCA) y afecta negativamente a la supervivencia del mismo. OBJETIVO Valorar el efecto de la preservación en frío sobre el desarrollo de la VCA en comparación con el trasplante inmediato, en el contexto de un TTC experimental de extremidad posterior en ratas bajo dosis subterapéuticas de inmunosupresión. MATERIAL Y MÉTODOS Se realizaron un total de 30 trasplantes de pata entre ratas cruzando el complejo mayor de histocompatibilidad. Ratas Lewis Brown-Norway fueron utilizadas como donantes (LBN RT1n) y Wistar-Lewis como receptoras (LEW RT1l), mediante una técnica modificada de trasplante heterotópico con enterramiento sin piel. Se mantuvieron con inmunosupresión diaria a dosis subterapéuticas (Ciclosporina A 2mg/Kg/día la primera semana postoperatoria, y 1mg/Kg/día las siguientes). Se valoraron los cambios producidos por el RC y la preservación en frío transcurridos 2 meses desde el trasplante en los dos grupos experimentales; trasplante inmediato (<1 hora de isquemia) frente a trasplante tras 7 horas de isquemia fría a 4ºC. Se valoró la supervivencia de los animales y el tiempo de intervención quirúrgica. El estudio del efecto se realizó a nivel histológico evaluando los cambios vasculares (presencia de vasculopatía, proliferación intimal [PI] y porcentaje de permeabilidad arterial [PPA]), el infiltrado linfocitario y la presencia de fibrosis en distintos tejidos del TTC. Se valoró inmunohistoquímicamente (IHQ) la presencia de infiltrados CD3+ (LT), CD4+ (LT ¿helper¿), CD8+ (LT citotóxico), CD20+ (LB) y CD68+ (macrófagos), así como el depósito intravascular de la fracción del complemento C4d. Para estudiar la expresión génica se realizó un análisis por PCR cuantitativa de las citoquinas TNF-¿, IL-6 e IL-10. RESULTADOS Se logró una supervivencia del 40% de las ratas intervenidas, con un tiempo medio de intervención de 181 minutos, recuperándose 12 aloinjertos vascularizados. Se encontraron diferencias estadísticamente significativas al comparar la media de PI en los vasos de gran calibre (16,13% vs 52,44%), así como el PPA (87,60% vs 60,91%), entre el grupo de trasplante inmediato y el de la preservación en frío (P = 0,004 en ambos casos). El PPA también presentó diferencias significativas en el grupo con frío al comparar el tercio medio del muslo y el tercio distal (P = 0,004 y 0,016 respectivamente). El porcentaje de permeabilidad disminuyó de manera significativa (P = 0,047) a medida que nos desplazamos distalmente en el árbol vascular. Se detectó un mayor número de vasos de pequeño y mediano calibre patológicos en las muestras sometidas a isquemia fría en ambos tercios musculares (P = 0,007 y 0,004 respectivamente). La IHQ presentó diferencias significativas para los infiltrados celulares CD3+, CD8+, CD20+ y CD68+ en el grupo sometido a preservación en frío (P < 0,05 en todos los casos). Los depósitos de C4d presentaron una tendencia cercana a la significación (P = 0,059). El análisis de las distintas citoquinas no encontró diferencias entre los grupos de experimentación. CONCLUSIONES Con este trabajo se demuestra la asociación de la preservación en isquemia fría y la VCA en el contexto de un TTC experimental. Tanto la intensidad de la misma, como su extensión y progresión distal, están relacionadas con el frío de manera significativa. La fibrosis y el infiltrado linfocitario a nivel de los tejidos más profundos, pueden ser marcadores de la intensidad del rechazo, pero su impacto exacto en el contexto de un TTC clínico así como su relación con la preservación en frío aún no está claro. Los resultados de la IHQ apoyan estas conclusiones y son concordantes con los resultados del análisis morfológico. El modelo experimental de trasplante de pata en rata a dosis infraterapéuticas de inmunosupresión es un modelo reproducible de rechazo crónico.