Respuesta inmune específica frente a cmvy su relación con la protección frente a la infección para el diseño de una vacuna

Resumen

A pesar de que la infección por CMV es generalmente asintomática en individuos inmunocompetentes, continúa siendo una de las principales causas de morbilidad y mortalidad tras el trasplante de órgano sólido. En un estudio previo realizado por nuestro grupo demostramos que la terapia anticipada en receptores de alto riesgo era segura y promovía la adquisición de una respuesta de células T específica de CMV que se asoció con un efecto terapéutico frente a la infección. Sin embargo, encontramos necesario analizar el papel deotros brazos de la respuesta inmune específica que podrían estar influyendo en este efecto protector, así como establecer puntos de corte para poder aplicarlo a la práctica clínica. Por su parte, el desarrollo de una vacuna preventiva frente a la infección por CMV ha ganado fuerza en los últimos años desde que fue propuesto como prioridad por el Instituto de Medicina Americano (IOM). Se han realizado distintos diseños de vacunación utilizando virus atenuados, DNA o proteínas recombinantes, pero hasta el momento ninguna de estas formulaciones han sido licenciadas para su uso en humanos. Es por ello que el conocimiento de los antígenos virales, su expresión, y su papel durante la infección serían buenas aproximaciones al desarrollo de una vacuna efectiva. El objetivo de este estudio fue en primer lugar definir parámetros de la respuesta humoral y celular específica de CMV relacionados con el control de la infección por CMV y enfermedad en una cohorte de pacientes TOS de alto riesgo de infección por CMV (D+/R-). En segundo lugar, analizar y comparar mediante Secuenciación de Nueva Generación (NGS) el perfil de expresión de los genes de CMV durante la infección de fibroblastos y células epiteliales para identificar los tránscritos virales más y diferencialmente expresados durante la infección de ambos tipos celulares, para identificar antígenos potenciales para el diseño de una vacuna. En la primera parte de esta tesis, observamos que aunque la respuesta celular T específica de CMV se asocia con la aclaración espontánea de la viremia de CMV, unpequeño porcentaje de pacientes con una respuesta celular T positiva están aún en riesgo de desarrollar enfermedad tardía por CMV. Además, demostramos que los pacientes con serología pretrasplante negativa para CMV desarrollan de novo una inmunidad humoral mediada por un amplio rango de anticuerpos neutralizantes. Aunque no encontramos relación entre los títulos de anticuerpos capaces de bloquear la infección de fibroblastos y la protección frente a la infección o la progresión clínica del paciente tras el trasplante, sí fuimos capaces de definir un punto de corte de títulos de anticuerpos neutralizantes de infección de epitelio (?480) que se correlaciona con la disminución de la infección y la protección frente a la enfermedad por CMV. Nuestros resultados sugieren que la cuantificación de los títulos de anticuerpos neutralizantes de la infección de células epiteliales (título?480), además de la respuesta celular T (CD8+ IFN-? +?0,25%), podría ser útil para distinguir entre pacientes que requieren una monitorización más cercana y aquellos que presentan un menor riesgo de desarrollar enfermedad por CMV. De esta forma, la combinación de la monitorización virológica e inmunológica de los pacientes podría optimizar la administración de la terapia anticipada en pacientes de alto riesgo de infección por CMV. Sin embargo, será necesario llevar a cabo estudios prospectivos con cohortes de pacientes más numerosas para confirmar los resultados presentados. La segunda parte de la tesis consiste en el estudio por RNA-Seq de los tránscritos virales durante la infección de fibroblastos y células epiteliales. Observamos que una gran cantidad de transcritos virales diferían entre ambos tipos celulares infectados por CMV, fibroblastos vs. células epiteliales. En este trabajo se postuló que los genes más expresados durante la infección por CMV con un papel importante en la estimulación de una respuesta inmune específica frente a CMV podrían ser buenos candidatos para el desarrollo de una vacuna frente a CMV. Por ello, proponemos que UL36 y US3, transcritos altamente expresados podrían ser de especial interés por su capacidad de activar tanto una respuesta de células T CD4+ como CD8+. Además, debido a que las células epiteliales son la primera barrera biológica encontrada por CMV y que la respuesta humoral específica de CMV tras la infección natural está dirigida especialmente a bloquear la infección de células epiteliales, US18, detectado en nuestro estudio como el mayor MAT durante las tres fases de infección por CMV de células epiteliales, podría ser un buen candidato a vacuna ya que además presenta la capacidad de activar la respuesta celular mediada por células T CD4+.