La fosfatasa SHIP-1 se asocia al hemITAM de Dectin-1 y modula respuestas funcionales frente a Candida albicans en células dendríticas

Resumen

Dectin-1 (CLEC7A) es un receptor lectina tipo C (CLR) que reconoce ß 1-3 glucanos presentes en la superficie de hongos patógenos oportunistas como Candida albicans. Tras la detección de su ligando, Dectin-1 une Syk a través de la tirosina 15 fosforilada del motivo hemITAM presente en su dominio citoplasmático y desencadena diferentes respuestas como fagocitosis, activación de rutas de señalización y factores de transcripción y producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). Aunque la mayoría de estos eventos de señalización son mediados por Syk, la contribución de otros módulos de señalización temprana apenas se ha estudiado. De cara a profundizar en ese estudio, exploramos las proteínas que interaccionaban con la cola intracelular de Dectin-1 tras su activación en células dendríticas (DCs). Encontramos que la fosfatasa SHIP-1 es una de las proteínas más representadas en la unión a la tirosina 15 fosforilada de Dectin-1. Tras la estimulación de DCs deficientes en SHIP-1, procedentes de ratones CD11c¿SHIP-1, con C. albicans muerta por calor (HKC), observamos un aumento en la fosforilación de Syk, pero otras vías de señalización por debajo de Syk y respuestas funcionales como activación de MAPKs, NF-¿B o NFAT, o producción de citoquinas no se ven afectadas. Sin embargo, la ausencia de SHIP-1 resultó en una mayor producción de ROS en DCs tratadas con HKC, que correlacionaba con una mayor actividad candidicida de estas DCs contra C. albicans viva. Ambos efectos son dependientes de Dectin-1, Syk y NADPH oxidasa. Estos resultados revelan una señalización compleja en CLRs que contienen motivos hemITAM, los cuales podrían ser sutilmente regulados mediante un balance de efectores y represores acoplados al hemITAM de manera temprana. Dectin-1 (CLEC7A) is a C-type lectin receptor that recognizes ß 1-3 glucans on the surface of opportunistic fungal pathogens such as Candida albicans. Upon ligand binding, Dectin-1 binds Syk through phosphorylated tyrosine15 in its hemITAM motif present in the cytoplasmic domain and triggers different responses such as phagocytosis, activation of signaling pathways, transcription factors and reactive oxygen species (ROS) production. Although Syk mediates most of these signaling events, the contribution of additional early signaling modules remains poorly explored. To address this question, we explored the interactome of Dectin-1 intracellular tail in dendritic cells (DCs). We found that the phosphatase SHIP-1 is one of the most represented proteins binding to the phosphorylated tyrosine 15 present in the hemITAM of Dectin-1. Following stimulation of SHIP-1 deficient DCs, from CD11c¿SHIP-1 mice, with heat-killed C. albicans (HKC), we observed an increase in Syk phosphorylation, but other signaling pathways downstream Syk and functional responses such as MAPKs, NF-¿B or NFAT activation, or cytokine production were unaffected. However, the absence of SHIP-1 resulted in enhanced ROS production by HKCtreated DCs, correlating with increased killing activity against live C. albicans. Both effects are dependent on Dectin-1, Syk and NADPH oxidase. These results reveal a complex signaling in CLRs containing hemITAM motifs, which could be subtly regulated by the balance of early effectors and regulators coupled to the hemITAM