Validation of an EIA technique for the determination of salivary cortisol in cattle

Resumen

En este trabajo se desarrolla y valida una técnica de enzimoinmunoensayo (EIA) para la determinación directa de cortisol en muestras de saliva de ganado vacuno. La saliva como muestra tiene gran importancia en los estudios de bienestar animal, ya que presenta ventajas respecto al plasma, como son el menor estrés al que se somete a los animales para su obtención y la menor interferencia que producen los componentes de la saliva en la determinación directa en el EIA. Hoy en día no existe en el mercado ningún método validado para la determinación de cortisol en saliva en la especie bovina. Las técnicas de radioinmunoensayo comercializadas para plasma de la especie humana (rango de detección de 10 a 100 ng ml-1) no son suficientemente sensibles para el ganado bovino, que presenta concentraciones de cortisol salival muy reducidas (< 4 ng ml-1), por ello no es posible su adaptación para esta especie, siendo los métodos de EIA los de elección. El límite de detección de la técnica EIA fue de 0,024 ng ml-1, mejorando la sensibilidad de técnicas descritas previamente; los coeficientes de variación intra e interensayo fueron de 1,47-7,30% y 2,40-9,78%, respectivamente. La recuperación de cortisol añadido a muestras de saliva fue de 91,36-126,5%. Las pruebas de paralelismo demostraron que es posible la determinación directa de muestras de saliva sin necesidad de extracción previa. La correlación existente entre las concentraciones de cortisol salival y plasmático fue alta (r = 0,75) siendo la relación cortisol saliva/plasma en torno al 10%. Por ello, en la valoración del eje corticotropo de la especie bovina es posible el uso de muestras de saliva en sustitución a las de plasma