Papel de p27 en la desregulación del ciclo y muerte celular inducida por aflatoxina b1 en hepatocitos humanos en cultivo

Resumen

Antecedentes: El carcinoma hepatocelular (CHC) representa el 5% de los casos de cáncer diagnosticados. Las tasas de supervivencia y recurrencia de los pacientes con CHC es desalentadora, especialmente en los diagnosticados en una etapa avanzada. Se ha sugerido que la expresión de un inhibidor del ciclo celular, p27, puede jugar un papel importante en CHC, sugiriéndose que puede ser una importante diana para regular la capacidad recidivante del tumor. El objetivo del presente trabajo es determinar el efecto de la deficiencia o sobreexpresión de p27 en hepatocitos sometidos a genotoxicidad experimental por AFB1, así como en la diferenciación de los tumores en pacientes con CHC. Material y métodos: Los hepatocitos se obtuvieron de ratones control (C57BL/6J) y deficientes en p27 (B6.129S4-Cdkn1btm1Mif/J) (Kackson laboratorios, Bar Arbor, Maine, USA) mediante perfusión del hígado con colagenasa. La sobreexpresión de p27 se realizó mediante la transfección de un plásmido pcDNA3 que incluía la secuencia codificante de p27 en HepG2. La genotoxicidad fue inducida por AFB1 (0.5, 5 and 50 µg(mL) en hpatocitos de ratón o HepG2 en cultivo. Se valoraron parámetros de apoptosis y necrosis celular, el grado de mutagénesis (8-hidroxiguanina), proliferación celular y expresión de p27, p21 y p53 por Western-blot y RT-PCR en tiempo real. Se incluyeron 24 pacientes sometidos a trasplante hepático, incluyéndose tumores bien diferenciados (n=12) y moderadamente diferenciados (n=12). Se analizó la expresión de p27 en tejido tumoral y no tumoral, bioquímica y superviviencia del paciente. Resultados: AFB1 induce daño en el DNA, reduce la expresión p27 y aumenta de muerte celular en hepatocitos en cultivo. La deficiencia en p27 incrementó la muerte celular y presencia de mutaciones en el DNA de los hepatocitos tratados con AFB1. La falta de expresión de p27 se correlacionó con un incremento de la expresión p21 y p53 en hepatocitos en cultivo y HepG2. Por el contrario, la sobreexpresión de p27 redujo la proliferación celular y la genotoxicidad inducida por AFB1 en células HepG2. La expresión de p21, y no p27, se asoció con un incremento de la diferenciación tumoral del CHC. Conclusiones: 1) La administración de AFB1 induce daño en el DNA celular, reduce la expresión de p27, la proliferación celular e incrementa la muerte celular en hepatocitos de ratón en cultivo. 2) La deficiencia en p27 incrementa la muerte celular y el daño en el DNA celular inducida por AFB1 en hepatocitos. 3) La sobreexpresión de p27 se asocia con un menor índice proliferativo y una menor acumulación de daño en el DNA y a una reducción de la muerte celular, en células HepG2 tratados con AFB1. 4) Elevados niveles proteicos de p27 y p21, así como bajos niveles de p53 en hepatocarcinoma, se asocian con un mayor grado de diferenciación del tumor y una mayor supervivencia de los pacientes diagnosticados en CHC y sometidos a trasplante hepático.