Nuevos metodos analiticos para la mejora y automatizacion de la determinacion de los hidroximetabolitos de la vitamina d3

Resumen

El objetivo perseguido con esta la investigación ha sido la puesta a punto de métodos analíticos automatizados, sensibles, selectivos, precisos y de bajo coste para la determinación de tres hidroximetabolitos de la vitamina D3 (24, 25-(OH)2-D3, 1,25-(OH)2-D3 y 25-OH-D3) y que responde a las necesidades de la instauración de la determinación de estos analitos como parámetros de rutina en laboratorios clínicos para el diagnóstico de enfermedades metabólicas óseas. La Memoria de la tesis doctoral se estructura en una introducción y dos partes que han dado lugar a la publicación de una revisión y ocho trabajos de investigación. En la primera parte se ha hecho hincapié en la mejora de los procedimientos de acondicionamiento, limpieza y preconcentración utilizando los principios de la extracción líquido-líquido para el acondicionamiento de la muestra, de la extracción líquido-sólido para la limpieza y preconcentración de los analito mediante la utilización de sorbentes como C18, aminopropil-sílice; así como la puesta a punto de un procedimiento de separación basado en lacromatografía líquida de alta resolución en fase reversa (CLAR-FR) con detección fotométrica con lo que se han propuesto por primera vez sistemas integrados de lumpieza de la muestra y preconcentración acoplados en línea con un sistema de separación/detección para la determinación de del 24, 25-(OH)2-D3 y del 25-OH-D3 en muestras clínicas con factores de preconcentración entre 50 y 100 veces superiores a los conseguidos por el procedimiento discontinuo. Se ha extendido este método a la multideterminación de vitaminas liposolubles. En la segunda parte se ha aprovechado la escasa reactividad de la molécula secosteroide para el desarrollo de etapas de derivatización post-columna previa a la detección. En este ámbito se ha innovado en los siguientes aspectos: Se ha utilizado una reacción de cicloadición 4+2 tipo DIels-A