Modulación del comportamiento de las células b en respuesta a estimulación por quimioquinas y antígenoMecanismos moleculares implicados

Resumen

Los linfocitos B, también conocidos como células B, encuentran su antígeno específico en los folículos de los órganos linfoides secundarios. Las células B migran activamente dentro de los folículos, guiadas por la quimioquina CXCL13 y su receptor CXCR5. El reconocimiento de antígeno a través del receptor de antígeno de la célula B (BCR, del ingles B Cell Receptor) induce la parada de la célula B y el establecimiento de la sinapsis inmunológica (SI) con la célula presentadora de antígeno. En este contexto, las células B reciben 2 tipos de señales, una señal de motilidad promovida por CXCL13/CXCR5 y una señal de parada mediada por el antígeno/BCR. Nuestro objetivo es estudiar como la comunicación entre CXCR5 y el BCR modula la dinámica de las células B y las consecuencias que esto supone en el encuentro con el antígeno y la activación de las células B. Hemos establecido un sistema experimental para estudiar en tiempo real la dinámica de las células B en respuesta a diferentes estímulos (quimioquinas, antígeno, ligandos de integrinas). En ausencia de ligandos de integrinas, CXCL13 indujo la polarización de la célula B; sin embargo, la presencia de una densidad critica de estos ligandos fue necesaria para las células B migraran. El tipo y la densidad de los ligandos de integrina modularon la migración de la célula B. Con este sistema, hemos recreado los datos obtenidos in vivo sobre la migración de las células B en los folículos. La presencia de antígeno unido a una membrana promovió un comportamiento heterogéneo de las células B que dependió de la fuerza de la señal del BCR. La señalización de CXCL13/CXCR5 no interfirió con la capacidad de las células B para forma la SI; sin embargo, aumentó la activación de las células B mediada por el BCR, afectando las adhesiones debidas a LFA-1. En células B que formaban una SI, CXCL13 promovió el reclutamiento de antígeno a la sinapsis, favoreciendo la formación de extensiones de membrana y la adhesión a través de LFA-1; en células B en movimiento, CXCL13 permitió la integración de señales a través del BCR mediante la formación de una plataforma migratoria adhesiva soportada por LFA-1. Ambos estados dinámicos fueron dependientes de la función del citoesqueleto de acto-miosina. Analizamos los mecanismos moleculares implicados en la parada de las células B. La activación del BCR por un antígeno soluble no impidió la movilidad de las células B promovida por la quimioquina, pero redujo la velocidad de migración. La estructura de la SI fue necesaria para detener a las células B. Demostramos que la proteína vinculina era reclutada a la SI, localizándose en el dominio de la SI rico en F-actina y LFA-1; sin embargo, tras el encuentro con el antígeno en forma soluble, vinculina no se localizó en la zona de contacto. El reclutamiento de vinculina podría ser mediado por la producción local de fosfatidilinositol 4,5 bifosfato (PIP2), debida a la acción de la fosfatidilinositol 4-fosfato 5-quinasa de clase I gamma (PIPKI¿). Al interferir con la localización de vinculina en la SI las células B recuperaron la migración en respuesta a CXCL13. La actividad de la proteína tirosin-quinasa Syk y de la proteína motora no muscular miosina II fue esencial para el reclutamiento y el mantenimiento de vinculina en al SI. Los datos sugieren que la parada de la célula B en migración tras el encuentro con el antígeno sobre una superficie es debida a una señalización local a través del BCR, que conduce al reclutamiento de vinculina y por tanto a la estabilización de la SI y la adhesión firme.