Regulación y función de la integrina a4b1 con los dominios hepii y hepiii de fibronectina.Papel en la reorganización del citoesqueleto y la formación de matrices de fibronectina

Resumen

La activación y regulación de la integrina a4b1es un mecanismo complejo e importante para procesos como la linfopoyesis tanto en células B como T, y otros como la adhesión firme y el rodamiento, dentro de la extravasación leucocitaría. Por eso hemos estudiado también la regulación de la actividad de esta integrina utilizando como modelo las células de leucemia T Jurkat. En los primeros años de esta TESIS hemos analizado los procesos de activación y regulación de la integrina alfa4beta1 (a4b1). Utilizando células leucémicas Jurkat hemos estudiado los efectos post-adhesión subsiguientes a la activación de a4b1 por mecanismos "inside-out" ( la activación va desde el interior hacia fuera, por ejemplo tratamientos con activadores de la PKC como PMA o PdBU, con quimioquinas como CXCL12, con anti-CD3, etc..) o "outside-in" (la activación va desde fuera hacia el interior, y la generan estimulos fisiológicos (ligandos) y estimulos externos (cationes divalentes como Mn2+, anticuerpos anti-beta1 como Ts2/16), que mimetizan esos efectos fisiológicos). Los RESULTADOS concretos obtenidos son los siguientes: 1. Hemos confirmado que todos los métodos de activación de a4b1 utilizados aumentan la adhesión a sus ligandos (los fragmentos FN-H89 (Hep III) y FNIII4-5 (Hep II) de la molecula de Fibronectina (FN) y la molecula endotelial VCAM-1), y ese aumento es a niveles similares. 2. Por medio de ensayos de inmunofluorescencia, tiñendo el citoesqueleto de actina con faloidina-rodamina, hemos observado morfologias diferentes, dependientes de la forma de activación de a4b1. Observamos una morfología célular elongada tras la activación con Mn2+,CXCL12 y CD3 "crosslinking" y una morfología de "spreading" celular tras la activación con PMA y Ts2/16. Esta respuesta diferencial no es solo exclusiva de una dosis determinada de ligando y activador. sino que se produce a diferentes dosis. Tampoco es particular de la linea celular leucémi