Papel del citoesqueleto subcortical de f-actina como elemento organizador de la maquinaria secretora en células cromafines bovinas

Resumo

En este trabajo nos hemos centrado en estudiar el papel que el citoesqueleto de F-actina puede cumplir como sistema de sostén para organizar la maquinaria secretora en las células cromafines bovinas, un modelo celular muy usado para el estudio de la secreción. En este sentido, hemos estudiado la disposición de los parches de membrana de canales de calcio dependientes de voltaje de tipo L y P/Q y de proteínas SNAREs, representadas por SNAP-25, y hemos comparado el contacto de estos microdominios con marcajes de la F-actina, así como la distancia media entre ambas estructuras, comparando la situación observada en células reales con una simulación al azar. Igualmente, se he estudiado la posibilidad de que el entramado de F-actina actúe como una barrera impermeable al calcio con experimentos con flúo-3, indo 1 y fura 2, generando un modelo matemático en colaboración con la universidad de Cantabria. Finalmente, centrandonos en el caso concreto de una posible interacción entre la F-actina y SNAP-25, se han realizado experimentos de microscopía TIRF para evaluar si el tratamiento con inhibidores específicos para la actina y la miosina, su motor molecular, podría afectar a la libertad de movimiento de los parches de SNAREs. Nuestros resultados de colocalización muestran un grado de colocalización mayor del esperado por azar, así como una menor distancia media. En cuanto a los experimentos dinámicos, tenemos resultados claros que indican diferencias significativas entre la movilidad de los parches control y los de las células tratadas, tanto en el plano paralelo a la membrana como en el eje perpendicular a ella, en los parámetros de velocidad, movimiento cuadrático medio, posición media y desplazamiento total. Todos estos resultados apoyan la hipótesis de que el citoesqueleto de F-actina interactúa con las proteínas SNARE y es capaz de influir en su posición y su dinamismo.