Estudio calorimétrico de la estabilidad térmica de pequeñas proteínas globulares y fragmentos

Resumo

En la presente memoria hemos realizado el estudio mediante calorimetria diferencial de barrido (dsc) de una proteina y tres dominios submoleculares aislados, todos ellos de bajo peso molecular que despliegan reversiblemente con un comportamiento, sin embargo, claramente diferenciado.El desplegamiento termico de la proteina -lactoglobulina b se ha estudiado en la region de ph acido y baja fuerza ionica. El proceso es parcialmente reversible y su analisis puede en principio realizarse segun el modelo de equilibrio de dos estados. Sin embargo, existe un proceso exotermico adicional al desplegamiento termico. Estudios realizados con esta proteina mediante dsc y dicroismo circular, en presencia de cloruro de guanidina, ha hecho posible la observacion experimental de la denominada desnaturalizacion por "frio", solo comprobada hasta la fecha para un numero muy reducido de proteinas. El segundo sistema estudiado es el fragmento de termolisina 205-316. El proceso de desplegamiento es reversible, y existe un efecto de concentracion de muestra sobre las trazas calorimetricas, que junto con la asimetria que presentan las mismas, hace que el proceso pueda describirse en base a un equilibrio de disociacion del dinero y posterior desplegamiento del monomero. Se han obtenido los parametros termodinamicos para el proceso de disociacion y el desplegamiento del fragmento; estos ultimos indican una estructura poco compacta para el monomero, y especialmente, para el dinero del fragmento. Por ultimo se ha llevado a cabo el estudio del desplegamiento termico en funcion del ph para los dominios sh3 fyn y abl. El desplegamiento en todas las condiciones sigue el modelo de equilibrio de dos estados, con unos parametros termodinamicos similares a los de otros dominios sh3 estudiados y a los de otras proteinas globulares. Se ha realizado tambien el estudio mediante dsc de la interaccion del dominio, fyn sh3 con dos peptidos sinteticos 3bp1 y 3bp1-m4y,