Nuevos procedimientos de inmovilización y modelado molecular en biosensores amperométricos

Resumen

En el trabajo de tesis se han desarrollado diferentes procedimientos de inmovilización de bioreactivos sobre la superficie del electrodo para la determinación de colesterol. En una primera parte de la memoria se describe el estudio de un biosensor amperométricos enzimático construido mediante inmovilización mediante entrampamiento físico en el interior de una matriz de polímero de polipirrol. Un importante novedad aportada fue la introducción de una capa adicional de polímero de polinaftaleno construida a partir de monómeros de 1,5 -Diaminonaftaleno. Esta nueva configuración se optimizó obteniéndose biosensores con buenas propiedades analíticas de permeabilidad y carácter conductor del biosensor. En una segunda etapa, se estudió la mejora en la transducción del peróxido de hidrógeno generado en la reacción enzimática entre el enzima colesterol oxidasa y el analito colesterol, mediante la co-inmovilización en la estructura del biosensor de un catalizador electroquímico de azul de prusia. Se observó un aumento de la corriente detectada en la reducción selectiva del peróxido de hidrógeno a un potencial de trabajo catódico lo que permitió la disminución de las interferencias. Se introdujo un novedoso procedimiento de inmovilización que consistió en la adición de una monocapa autoensamblada sobre el electrodo (de mercaptano) lográndose un aumento en el tiempo de vida en el biosensor como consecuencia del incremento en la adherencia de la capa de azul de prusia. En la tercera parte de la tesis se mejoró la eficacia del biosensor de colesterol mediante un novedoso procedimiento de reconstitución de apo-enzima (apo-COx) optimizado (reconstitución in situ) sobre la superficie del electrodo. Se realizó la separación del centro activo del enzima FAD de su apo-proteína para posteriormente realizar la reconstitución de la misma sobre una monocapa de FAD inmovilizado sobre el electrodo. Este procedimiento permitió el enlace de cada mol