Estudio de expresión inmunohistoquímica de pd-l1 en las células tumorales y en las células inmunes asociadas al tumor en el carcinoma de células pequeñas de pulmón

Resumen

El bloqueo de los puntos de control inmune con anticuerpos monoclonales ha surgido recientemente como una nueva herramienta terapéutica en el campo de la oncología. Uno de dichos puntos de control está regulado por el receptor PD-1 (Programmed cell death 1) presente en la superficie de las células T y encargado de la regulación de la activación y proliferación de esta subpoblación linfocitaria. Su ligando, PD-L1, es expresado por diferentes tipos de células neoplásicas; se ha descrito que la inhibición de esta ruta con anticuerpos anti PD-1/PD-L1 es capaz de ejercer una acción antitumoral. Un mejor conocimiento del microambiente inmune asociado al carcinoma de pulmón de células pequeñas (CPCP) mediante su caracterización inmunohistoquímica, así como la cuantificación del biomarcador de inmunoterapia PD-L1, aportaría una información de gran interés, que potencialmente permitiría la identificación y selección de los pacientes en los que el uso de terapias basadas en el restablecimiento del sistema inmune tendrían un mayor beneficio. Estudio de la expresión inmunohistoquímica de PD-L1 en el CPCP, tanto en las células tumorales como en los infiltrados inflamatorios asociados al tumor (TILs), e incluyendo la valoración en ambos tipos celulares del porcentaje global de expresión de dicho marcador, la intensidad de tinción, el patrón de tinción intracelular y la localización de las células PD-L1+ en los distintos componentes del tumor (estroma y nidos epiteliales neoplásicos) según los patrones definidos en el estudio y, en relación a los TILs PD-L1+, las diferencias en su composición celular. Evaluación del microambiente inmune del CPCP, valorando tanto su cuantía global como la composición celular en el estroma y en los nidos tumorales. Valoración de la correlación de las distintas características de la expresión de PD-L1 entre sí, de las observadas en las células tumorales con respecto a las de los TILs y de ambas en relación a las variables clínicas de la serie. Comparación de los resultados obtenidos con los datos existentes hasta la fecha sobre la expresión de PD-L1 en el CPCP. MATERIALES Y MÉTODOS Se realizó un estudio retrospectivo sobre 90 muestras con diagnóstico histológico de CPCP correspondientes a biopsias diagnósticas o piezas quirúrgicas fijadas en formol e incluidas en parafina procedentes del archivo del Servicio de Anatomía Patológica del Hospital Universitario HM Sanchinarro. A partir de los bloques seleccionados se obtuvieron nuevos cortes sobre los cuales se realizó el estudio inmunohistoquímico, que incluyó PD-L1 y CD8 y para cuya realización se empleó una plataforma de tinción inmunohistoquímica automatizada siguiendo protocolos de laboratorio optimizados e incluyendo controles positivos y negativos. El estudio microscópico de cada uno de los casos se llevó a cabo sobre las células tumorales y sobre los infiltrados inflamatorios asociados al tumor, e incluyó: 1) la valoración automatizada de los linfocitos T CD8+ en el estroma tumoral y en los nidos neoplásicos; 2) la evaluación al microscopio óptico de los datos relativos a la expresión de PD-L1 previamente descritos (expresión porcentual, patrón de tinción intracelular, patrón de localización de las células PD-L1+ en los distintos componente de la neoplasia y patrones de composición celular de los TILs PD-L1+). De manera paralela se creó una base de datos donde se incluyeron las observaciones citadas así como la información clínica de la que se dispuso para cada caso (edad, sexo, ECOG, localización del tumor al diagnóstico, estadio TNM, tratamiento, aparición de recidiva, estado en el último seguimiento y supervivencia global, entre otros). Por último se realizó el análisis estadístico de los datos mediante el uso de los tests pertinentes. En una serie de 90 muestras de carcinoma de pulmón de células pequeñas (CPCP), se ha observado, en las células tumorales, tinción inmunohistoquímica positiva para PD-L1 en el 48,89% de los casos. En las células inflamatorias asociadas al tumor o TILs, este porcentaje asciende al 58,89%. En las células tumorales, el patrón de tinción predominante ha sido el intenso sobre el débil, observándose en el 88,64% de los casos. Respecto al patrón de tinción intracelular, un 54,55% de los casos presenta mayor tinción en el citoplasma que en la membrana. En los TILs también se ha observado predominio de la tinción intensa en el 94,34% de los casos. Al contrario que en las células tumorales, el patrón de tinción intracelular predominante ha sido el membranoso (50,94% de los casos). Las células tumorales PD-L1+ se situaban mayoritariamente en la zona periférica de los nidos tumorales (70,45%). En los TILs PD-L1+ se ha observado un discreto predominio de la presencia simultánea tanto en estroma como en los nidos neoplásicos (50,94%) frente a la localización exclusiva en el estroma o en el interior de los agregados tumorales (41,51% y 7,55%, respectivamente). En la composición celular de los TILs PD-L1+, el linaje celular predominante ha sido la estirpe macrofágica sobre la linfocitaria (45,28% de los casos). En los casos de TILs con células PD-L1+ en cuantía menor al 1%, la composición celular se invertía predominando los linfocitos sobre los macrófagos. No hemos encontrado asociación estadísticamente significativa entre la expresión inmunohistoquímica de PD-L1, tanto en las células tumorales como en los TILs, con ninguna de las variables clínicas evaluadas. La ausencia de expresión de PD-L1 en las células tumorales, aunque no llega a alcanzar significación estadística, muestra una tendencia a la asociación con la recidiva tumoral (p=0,057). La agrupación de los tumores en base al estatus combinado de expresión de PD-L1 en células tumorales y en los TILs ha mostrado que, en el CPCP, los grupos más numerosos son aquéllos que muestran concordancia en el resultado de la tinción para este biomarcador en ambos componentes de la neoplasia. Esta agrupación no se asoció de manera estadísticamente significativa con ninguna de las variables clínicas evaluadas, a excepción de la afectación ganglionar (p=0,005) y el estado del paciente en el último seguimiento (p=0,011). En el CPCP el análisis de la tinción inmunohistoquímica de PD-L1 en las células tumorales y en los TILs según los intervalos recogidos por la IASLC para el clon SP142 supone una disminución del porcentaje total de casos con células tumorales y/o inflamatorias PD-L1+. Al agrupar las células tumorales PD-L1+ según las categorías TC se observa una asociación estadísticamente significativa entre el porcentaje de células positivas para este biomarcador y la intensidad de tinción (p<0.001). Esta agrupación en categorías no ha mostrado asociación estadísticamente significativa con ninguna de las variables clínicas incluidas en el estudio. En relación a las categorías IC, se ha observado una asociación estadísticamente significativa de esta agrupación con el estadio en términos de enfermedad localizada versus enfermedad extensa. En nuestra serie, los pacientes con enfermedad localizada se incluían mayoritariamente en la categoría IC3, mientras que aquéllos con enfermedad extensa pertenecían en su mayor parte a la categoría IC0. En esta misma línea de resultados, hemos encontrado que los casos clasificados en la categoría IC0 tienen mayor capacidad de dar metástasis a distancia (estadio M1) que los casos clasificados en la categoría IC3 (62,86% versus 39,13% respectivamente, p=0,038). Tal y como hemos comentado previamente, el grupo de Ishii et al (2015) encuentra que la expresión de PD-L1 en las células tumorales del CPCP confiere buen pronóstico en términos de supervivencia global y enfermedad limitada, incluso en el análisis multivariante. Con respecto al papel de la expresión de este biomarcador en las células inflamatorias, hasta el momento no hay trabajos publicados que clarifiquen este punto, por lo que los resultados obtenidos en esta serie necesitarían ser refrendados en estudios más amplios que permitieran demostrar la importancia de la expresión de PD-L1 en el componente inflamatorio del CPCP. En el CPCP, el número de linfocitos T CD8+/mm2 es mayor en el estroma que en el interior de los nidos neoplásicos. Esta distribución se mantiene independientemente de la categoría TC y en todas las categorías IC a excepción de la IC1, donde el número de linfocitos T CD8+/mm2 es mayor en los nidos neoplásicos.