Desoxiuridina 5' trifosfato nucleótido hidrolasa (dutpasa) de leishmania majorcaracterización de un potencial blanco de acción de fármacos

Zusammenfassung

Leishmania major es el protozoo parásito agente causal de la leishmaniasis, la cual afecta a 12 millones de personas en 88 países de todo el mundo. El tratamiento actual está basado en antimoniales pentavalentes, los cuales además de su baja efectividad, presentan alta toxicidad, por lo que se hace necesarios desarrollar nuevos compuestos para controlar esta enfermedad. La enxima desoxiuridina 5'-trofosfato-nucleótido hidrolasa (dUTPasa) cataliza la hidrólisis de dUTP a dUMP y pirofosfato, siendo crítica en el mantenimiento de los niveles intracelulares de nucleótidos pirimidínicos, y carece de homología con las enzimas descritas en otros organismos, por lo que podría ser un atractivo blanco de acción de fármacos en el futuro. En primer lugar, se ha llevado a cabo una caracterización cinética exhaustiva, basada en un método de cinética rápida continuo, poniéndose de manifiesto notables diferencias con la enzima humana, tales como la capacidad de hidrolizar eficientemente dUDPO, además del derivado trifosfato, y la alta inhibición producida por el producto (dUMP). Otra gran diferencia encontrada es también la conformación cuaternaria dimérica, siendo la primera vez que se describe una dUTPasa no trimérica o monomérica. Además, se ha estudiado la inhibición "in vitro" del enzima por distintos compuestos análogos al dUTP, algunos de los cuales inhiben selectivamente la enzima parasitria, lo que junto con las diferencias catalíticas y estructurales, la hacen una atractiva diana terapéutica. Al mismo tiempo, se ha descrito una localización dual del enzima (nuclear y mitocondrial), presentando una única forma en ambos orgánulos. Con objeto de determinar la estructura tridimensional de esta enzima se han puesto a punto condiciones de cristalizaicón en condiciones nativas y formando complejos con dUDP y dUTP, a partir de los cuales en un futuro próximo se podrá obtener dicha estructura tridimensional permitiendo