Producción recombinante y caracterización de la proteína sp-c del surfactante pulmonar

Resumo

La proteina SP-C forma parte del surfactante pulmonar, una mezcla de lípidos y proteínas que recubre los alvéolos, indispensable para la respiración. la SP-C e5 un componente crítico en las preparaciones usadas para el tratamiento del sindrome de distrés respiratorio en los fetos prematuros. El objetivo principal de esta tesis ha sido la puesta a punto de un nuevo método de producción de la proteína SP-C, mediante tecnología recombinante que podría servir como base para la obtención de nuevos surfactantes sintéticos, asi como una herramienta inmejorable en la cararterización de determinantes estructura-función con el objetivo último de intentar mejorar las propiedades tensioactivas de la proteína. Hemos descrito un nuevo método de obtención de la proteína SP-C recombinante de cultivos bacterianos, que está basado en una estrategia de sobreexpresión de proteínas transmembrana en procariotas y en las extracciones orgánicas empleadas en el aislamiento de la SP-C nativa a partir de lavados pulmonares. Este método resultó altamente eficaz en la preservación de la estructura helicoidal de la proteína, la principal caraderistica de su actividad. Además hemos diseñado variantes de la SP-C con dos triptófanos y dos cisteinas en las posiciones 5 y 6 para estudiar el efecto de los resíduos aromáticos en el segmento N-terminal de la proteína. En este caso el objetivo era comprobar hasta que punto una mayor actividad de la proteína podía estar definida par una mayor afinidad del segmento N-terminal hacia las interfases comparativamente con la secuencia utilizada inicialmente que presenta dos resíduos de fenidalarina en las posiciones mencionadas. Según esta hipótesis la variante con dos triptófanos podría mostrar una actividad aún mayor que la forma de SP-C que posee fenilalaninas, mientras que la que pasee doS cisteínas podría mostrar una actividad inferior. Los resultados experimentales de los análisis estructurales mostraron que