Estudio genético de inmunodeficiencias primarias: Desarrollo e implementación de algoritmos diagnósticos

Resumen

Las inmunodeficiencias primarias (IDP) son un grupo de más de 350 enfermedades, en su mayoría monogénicas, caracterizadas por la deficiencia y/o desregulación de uno o más componentes del sistema inmunitario (SI). Debido a su baja prevalencia se engloban dentro del conjunto de las llamadas enfermedades raras y en ocasiones comprometen la vida del individuo, siendo el trasplante de progenitores hematopoyéticos la única opción terapéutica posible a día de hoy. En este contexto, la existencia de centros especializados en el diagnóstico integral de estas patologías es de vital importancia, siendo la detección de la causa genética subyacente a la enfermedad una de las partes imprescindibles en dicho proceso. Los avances tecnológicos en el campo de la genética acaecidos en la última década han supuesto una revolución en lo que al diagnóstico genético se refiere. La aparición de metodología capaz de detectar mutaciones a lo largo de todo el genoma ha permitido, por un lado, que la ratio diagnóstica con respecto a enfermedades conocidas aumente considerablemente y por otro, que el descubrimiento de nuevas enfermedades con base genética previamente desconocida se incremente de manera casi exponencial. En el campo de las IDP ha sido la secuenciación masiva de última generación (NGS, Next Generation Sequencing) la que ha marcado un antes y un después, favoreciendo la descripción de alrededor de 150 nuevas entidades desde el año 2011 hasta la actualidad. Así, la adquisición y el correcto manejo de este tipo de tecnología moderna son ya imprescindibles en centros dedicados al diagnóstico de estas patologías. La primera parte de esta tesis recoge la puesta a punto y/o aplicación, en un centro de diagnóstico de IDP, de un panel de genes de NGS así como de otras metodologías complementarias para el diagnóstico de estas enfermedades, como MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification), arrays-CGH (Comparative Genome Hibridization) o de SNP (Single Nucleotide Polymorphisms), RTPCR (Retro-transcriptase Polymerase Chain Reaction), citometría de flujo para la detección de proteínas y ensayos funcionales. La utilización de dichas metodologías se ha llevado a cabo a partir de la creación de algoritmos diagnósticos exclusivos del tipo de mutación que se sospeche y/o de las características del gen o grupo de genes en los que se sospeche. Así, este apartado pretende servir de guía estratégica para el diagnóstico genético de rutina de inmunodeficiencias primarias. La segunda parte de esta tesis se centra en la descripción de dos nuevas IDP (deficiencia de IRF4 y deficiencia de IRF9), previamente desconocidas, mediante el uso de, entre otras técnicas, NGS. Se muestra la completa caracterización clínica, inmunológica, histológica y finalmente genética de los 3 pacientes afectados y de algunos de sus familiares de primer grado.