Caracterización molecular de los receptores de somatostatina (sst) porcinos y de sus interacciones, e indentificación de dos nuevas isoformas truncadas funcionales del sst5 humano y porcino

Zusammenfassung

En esta Tesis Doctoral se aborda el estudio de los receptores de somatostatinta porcinos (sst) y de nuevas isoformas truncadas del sst5 humano y porcino, intentando establecer su posible relación con procesos celulares normales y patológicos. En primer lugar, se clonaron los receptores porcinos expresados en hipófisis, psst1, psst2, psst3 y psst5A, los más importantes implicados en el control de la secreción de la hormona del crecimiento (GH). Posteriormente se transfectaron en modelos celulares heterólogos en los que se evaluó su capacidad de regular tanto el nivel de AMP como el de calcio libre citosólico en respuesta a su ligandos, somatostatina (SRIF) y cortistatina (CST). Por otra parte, estudiando interacción física mediante FRET, se observó que los psst existen en forma dimérica y oligomérica, pudiendo además heterodimerizar de forma selectiva. Uno de estos receptores, el psst2, demostró un perfil farmacológico y funcional típico de sst2, pero unas características únicas en cuanto homodimerización/disociación e internalización en respuesta a SRIF. Durante la caracterización de los psst, se clonaron dos isoformas truncadas del psst5, llamadas psst5B y psst5C, de 6 y 3 dominios transmembrana (DTMs), ambas funcionales y que responden de forma selectiva a SRIF y a CST respectivamente. Estos receptores se localizan preferentemente en acúmulos intracelulares y colocalizan con las isoformas no truncadas, alterando la típica localización de éstas últimas en la membrana plasmática cuando se coexpresan en distintos modelos celulares. Se han clonado dos isoformas truncadas del sst5 humano, análogas a las porcinas, llamadas hsst5B y hsst5C, de 5 y 4 DTMs respectivamente. Se comportan de forma similar a sus análogas porcinas en términos funcionales, de localización subcelular y de interacción física con los hsst no truncados y además, están presentes en tumores hipofisarios y en tumores de mama, donde se coexpresan con otros hsst.