Desarrollo de métodos de RT-PCR en tiempo real para la cuantificación de mohos toxigénicos viables en alimentos

Resumen

Algunas especies de mohos pueden crecer y producir micotoxinas en alimentos como cereales y derivados cárnicos curado-madurados. Las más importantes debido a su toxicidad e incidencia son las aflatoxinas (AFs) y ocratoxina A (OTA). Por ello, sería necesario el desarrollo de herramientas que ayuden a evitar o minimizar la presencia de estas micotoxinas en alimentos. En este sentido, sería útil disponer de métodos rápidos y eficaces como la RT-qPCR que permitan estudiar cambios en la expresión de genes implicados en la biosíntesis de OTA y AFs anterior a la producción de las mismas que puedan ser incorporados a los programas de monitorización y vigilancia de sistemas APPCC. El objetivo de esta Tesis Doctoral fue desarrollar métodos de RTqPCR para cuantificar mohos viables productores de AFs y OTA en alimentos. Para ello, se optimizó en primer lugar un protocolo de extracción de ARN fúngico directamente de alimentos que combinaba la ruptura del micelio con el mortero y la utilización del kit comercial RNeasy. A continuación, se diseñaron y optimizaron métodos de RT-qPCR basados en los genes aflP, aflR, aflS, otapks y otanps implicados en la biosíntesis de AFs y OTA. Por último, se validaron los métodos en matrices alimentarias donde habitualmente crecen estos mohos detectándose la expresión de estos genes antes de que las micotoxinas sean producidas. Por tanto, los métodos de RT-qPCR optimizados en esta Tesis Doctoral son herramientas útiles y eficientes que pueden ser utilizadas para prevenir la presencia de micotoxinas en alimentos y proteger así la salud del consumidor.