Aproximación fenotípica y molecular a la inducción y detección de resistencia a equinocandinas en Candida glabrata

Resumen

Esta tesis ha pretendido dar luz a algunos interrogantes sobre el desarrollo y detección de resistencia a equinocandinas en C. glabrata mediante estudios estructurados en los siguientes tres capítulos, Adquisición in vitro de resistencia secundaria a equinocandinas en aislados de C. glabrata y mecanismos moleculares implicados, Determinación de parámetros cinéticos de crecimiento in vitro en aislados de Candida spp. y Detección rápida de resistencia a equinocandinas en Candida spp. En el primer capítulo se estudió la capacidad in vitro de C. glabrata de adquirir resistencia tras exposición a micafungina, simulando los espacios anatómicos en los que se observan bajas concentraciones de candinas y se determinó la concentración preventiva de mutantes, la ventana de selección de mutantes y la frecuencia de mutación a equinocandinas en esta especie. Además, se comparó la virulencia entre cepas de C. glabrata sensibles y resistentes a equinocandinas en un modelo de Galleria mellonella. Estudios previos han propuesto que la adquisición de resistencia en C. glabrata puede ser debida a defectos en la reparación del ADN, exactamente en el gen MSH2. Se estudió la secuencia del gen MSH2 y se evaluó su relación con el genotipo, la posible adquisición de resistencia antifúngica in vitro e in vivo y el pronóstico del paciente. Como resumen, se demostró que la adquisición de resistencia a equinocandinas en C. glabrata es rápida y fácil, especialmente en concentraciones por debajo de 2 miligramos litro. Por contra, no se observó un impacto significativo en la virulencia entre cepas de C. glabrata sensibles y resistentes a equinocandinas. Por último, se demostró que la presencia de alteraciones en el gen MSH2 en aislados de C. glabrata no se correlaciona con genotipos específicos, ni con la adquisición de resistencia antifúngica in vitro ni in vivo, ni con el uso previo de antifúngicos. En el segundo capítulo se determinaron parámetros cinéticos en aislados de Candida spp. causantes de candidemia, para evaluar posibles diferencias inter e intra especie incluyendo, cepas de C. glabrata sensibles y resistentes a fluconazol y a equinocandinas. Se analizó el crecimiento de todas las especies durante el tiempo de incubación imitando las condiciones del método de EUCAST. Con este estudio se encontraron diferencias significativas inter e intra especie en los parámetros cinéticos estudiados, siendo C. glabrata la especie que mostró la mayor tasa de crecimiento. Además, la resistencia a las equinocandinas en C. glabrata podría tener un impacto en la curva cinética de crecimiento. Al mimetizar la curva con el método de EUCAST, se observó que se pueden anticipar los resultados de sensibilidad en C. glabrata, C. tropicalis y C. krusei. En el tercer capítulo se evaluó el papel de dos técnicas rápidas de detección de resistencia a las equinocandinas en diferentes especies de Candida, el Etest y las placas de agar que contienen anidulafungina realizados directamente en hemocultivos positivos. Se concluyó que las placas con anidulafungina son útiles pero no rápidas para el cribado de la resistencia en C. glabrata, y que el Etest de micafungina y anidulafungina, es un procedimiento rápido y fiable para detectar resistencia en Candida spp., incluso cuando las cepas de C. glabrata resistentes a las candinas están infrarrepresentadas.