Desarrollo de un modelo bovino de infección experimental por besnoitia besnoiti

Resumo

La besnoitiosis bovina es una enfermedad crónica y debilitante del ganado vacuno causada por el protozoo apicomplejo Besnoitia besnoiti. Actualmente, su control solo es posible mediante medidas de manejo asociadas a un diagnóstico temprano, ya que fármacos y/o vacunas no están disponibles en Europa. Diversos fármacos han mostrado efectividad en modelos in vitro de cultivo celular. Sin embargo, éstos no han sido testados in vivo ya que, por el momento, un modelo animal de infección experimental no está disponible para esta enfermedad. Por ello, en esta Tesis Doctoral, se ha desarrollado un modelo de infección experimental en el ganado vacuno para la infección por B. besnoiti. Se inocularon en bovinos, bajo el mismo diseño experimental, los dos estadios infectivos conocidos hasta el momento del parásito: taquizoíto y bradizoíto. Todos los ensayos se complementaron con estudios histológicos y moleculares en los órganos diana y con el estudio de la respuesta inmune. Se administraron por vía intravenosa tres dosis diferentes: 108, 107 y 106 de taquizoítos en terneros y, a continuación, 106 taquizoítos en novillos. Se reprodujo la fase aguda de la enfermedad en todos los animales inoculados con una gravedad leve-moderada, sin detección de signos clínicos macroscópicos de la fase crónica. En una segunda infección experimental, se testaron la ruta de inoculación subcutánea e intradérmica en terneros inoculados con 106 taquizoítos. De nuevo, la detección de la besnoitiosis aguda y la escasa distribución intraorgánica del parásito fueron los hallazgos más relevantes. Por lo tanto, ni la dosis parasitaria ni la ruta de inoculación fueron factores determinantes en el desarrollo de la besnoitiosis crónica cuando se inocularon taquizoítos. En un nuevo ensayo, se administraron 106 bradizoítos en terneros por vía intravenosa, subcutánea e intradérmica, respectivamente. La infección aguda se clasifico como leve-moderada y la fase crónica, el resultado más relevante, como moderada-grave. Se observaron quistes oculares patognomónicos en todos los animales infectados siendo más abundantes en el grupo inoculado por vía intradérmica. Las lesiones microscópicas compatibles tanto con la fase aguda como con la fase crónica de la enfermedad coexistieron siendo el daño vascular y la inflamación las más frecuentes. Por lo tanto, el estadio de bradizoíto y la ruta intradérmica de inoculación son variables determinantes en el establecimiento de la infección crónica. Además, las infecciones experimentales nos proporcionaron un amplio panel de sueros bien caracterizados donde se estudió por primera vez la cinética de las inmunoglobulinas del isotipo M en la infección por B. besnoiti. El objetivo fue mejorar el diagnóstico temprano in vivo de la besnoitiosis aguda. Se desarrolló un ELISA para la detección de IgM, y se monitorizó la avidez de los anticuerpos IgG en sueros de infección experimental e infección natural. Se detectó una rápida respuesta de IgM previa a la seroconversión de IgG asociada a la fiebre en los terneros infectados experimentalmente. En la infección natural, los animales en la fase aguda de la enfermedad mostraron resultados positivos de IgM y negativos de IgG, seguido de seroconversión de IgG. En la fase crónica, se observaron resultados positivos tanto para IgM como IgG. Con respecto a la avidez de la IgG, se detectó un incremento progresivo a medida que avanzó la infección en los terneros infectados experimentalmente, aunque los valores de baja avidez coexistieron con quistes visibles en la conjuntiva ocular. En conclusión, se han desarrollado dos modelos de infección experimental en terneros. Uno representativo de la besnoitiosis subclínica, al inocular taquizoítos, y otro representativo de la besnoitiosis crónica con detección de quistes tisulares macroscópicos al inocular bradizoítos por vía intradérmica. Además, se ha mejorado el diagnóstico in vivo de la besnoitiosis aguda mediante el empleo de un ELISA de IgM y de avidez.