Linfocitos T cooperadores foliculares circulantes en trasplante renal

Resumen

Los linfocitos T cooperadores foliculares (Tfh), están especializados en la cooperación con los linfocitos B para que éstos se diferencien a células plasmáticas, por lo que son necesarios para la producción eficiente de anticuerpos. Los linfocitos T cooperadores foliculares que circulan en sangre periférica (cTfh) son equivalentes a los Tfh, que están localizados en los órganos linfoides secundarios. Dado el papel fundamental de las células Tfh en la respuesta humoral, es posible pensar que en el contexto del trasplante, las células Tfh favorezcan una respuesta mediada por anticuerpos antiHLA (Anticuerpos frente a Antígenos Leucocitarios Humanos) y que pudieran estar asociadas con ABMR (Rechazo mediado por anticuerpos) y pérdida del injerto.La relación entre las células cTfh y la sensibilización antiHLA todavía no se ha demostrado suficientemente; y no existen muchos datos publicados sobre la posible asociación entre cTfh y el rechazo del órgano trasplantado. La detección de cambios en los niveles de cTfh antes incluso de la formación de anticuerpos antiHLA y el rechazo podría ser de utilidad como biomarcadores en el trasplante e identificaría a las Tfh como posible diana terapéutica. En este estudio se incluyeron todos los trasplantados de riñón entre noviembre de 2014 y junio de 2016 en el hospital 12 de Octubre (n=206). Las cTfh se midieron en el mismo día de extracción de sangre periférica de los pacientes, tomando muestras prospectivamente antes del trasplante, a los 7 y 14 días después del trasplante y a los 1, 3, 6 y 12 meses postTx. Se utilizó el citómetro de flujo BD Canto II y los resultados se analizaron con el software Flow Jo V10. Se definieron las cTfh como CD4+CXCR5+ o CD4+CXCR5+PD1hiCCR7lo. Las cTfh junto con las células B de memoria del mismo individuo se cocultivaron in vitro para demostrar la capacidad de las cTfh para estimular la conversión a plasmablastos y la producción de anticuerpos. Se utilizó el sorter InfluxTM para separar las células. Se cocultivaron las células cTfh y las células B de memoria en una proporción 1:1 durante 7 días en presencia de SEB (Staphylococcal enterotoxin B de Staphylococcus aureus). La diferenciación de células B de memoria a plasmablastos (definidos como CD19+CD27hiCD38hi) se midió por citometría y se analizó mediante Flow Jo. Se midieron los niveles de IgG en los sobrenadantes de los cocultivos mediante ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) sandwich. Los anticuerpos antiHLA se midieron mediante citometría basada en microesferas (Luminex Technology, LABScreen Mixed® kit, One Lambda, CA). La señal fluorescente se midió usando LAB scan 100 Flow Cytometry y se analizaron mediante el software HLA-Fusion (One Lambda). Se confirmó que las cTfh representan funcionalmente a las Tfh de los órganos linfoides secundarios y pueden ser llamadas Tfh circulantes. Se observó que el porcentaje de células cTfh fue significativamente menor en pacientes con ERC cuando se compararon con los controles sanos no trasplantados. Se demostró que las células cTfh están aumentadas en pacientes con ERC que habían estado expuestos a aloantígenos, como es el caso de transfusiones de sangre y retrasplante. Además, antes del trasplante los pacientes con anticuerpos antiHLA presentaron más cTfh que los pacientes no sensibilizados. Después del trasplante, los tratamientos de inducción tuvieron diferentes efectos sobre las células cTfh. Timoglobulina fue muy eficaz eliminando las células cTfh en los primeros meses después del trasplante. Por el contrario, basiliximab no tuvo el mismo efecto. También, después del trasplante se ha demostrado una expansión de cTfh en los pacientes que desarrollaron anticuerpos antiHLA de novo. El aumento de cTfh antes del trasplante se asoció con un aumento del riesgo de sufrir rechazo agudo del injerto renal durante el primer año después del trasplante.