Análisis de la regulación transcripcional de diversos factores de complemento de baja expresión en la línea hep-g2

Resumen

LOS FACTORES TERMINALES DEL COMPLEMENTO HUMANO SE SINTETIZAN MAYORITARIAMENTE EN EL HIGADO, SIN EMBARGO LA LINEA DERIVADA DE HEPATOMA HEP-G2, QUE PRODUCE LA MAYORIA DE LAS PROTEINAS DEL COMPLEMENTO, NO EXPRESA ALGUNOS COMPONENTES COMO C6, C7 Y FACTOR H. ESTE HECHO HA DIFICULTADO ENORMEMENTE EL ESTUDIO DE LA REGULACION DE ESTOS GENES. CON EL OBJETIVO DE ESTUDIAR LA REGULACION DE ESTOS GENES NOS HEMOS PLANTEADO EL OBJETIVO DE AISLAR Y CARACTERIZAR LAS REGIONES PROMOTORAS DE LOS TRES GENES HUMANOS: C6, C7 Y FACTOR H. HEMOS AISLADO APROXIMADAMENTE 1 KB CORRESPONDIENTE A LA REGION PROMOTORA DE C6, C7 Y FACTOR H, Y DETERMINADO SU INICIO DE TRANSCRIPCION EN HIGADO HUMANO. LOS TRES GENES TIENEN UN INICIO DE TRANSCRIPCION UNICO EN HIGADO, PERO EXCEPTO C7, CARECEN DE UNA CAJA TATA CANONICA. TODOS POSEEN NUMEROSAS SECUENCIAS CONSENSO TANTO PARA FACTORES DE TRANSCRIPCION UBICUOS, COMO ESPECIFICOS DE HIGADO. PARA ANALIZAR LA ACTIVIDAD FUNCIONAL DEL PROMOTOR DE C6 HEMOS CONSTRUIDO UN SISTEMA "REPORTER" Y ANALIZADO SU EXPRESION MEDIANTE ENSAYOS DE TRANSFECCION TRANSITORIA. MEDIANTE ESTOS EXPERIMENTOS HEMOS CARACTERIZADO QUE LA AUSENCIA DE EXPRESION DE C6 EN LA LINEA HEP-G2 SE DEBE A LA AUSENCIA DE TRANSCRIPCION DE SU PROMOTOR EN ESTA LINEA. MEDIANTE ENSAYOS DE RETARDO EN GEL CARACTERIZAMOS QUE ESTO SE DEBE A LA AUSENCIA DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION HEPATICO C/EBPA EN LA LINEA HEP-G2. ESTE FACTOR SE UNE A LA SECUENCIA C/EBP LOCALIZADA EN -67 DEL GEN DE C6 Y ES IMPRESCINDIBLE PARA SU EXPRESION. LA TRANSFECCION DE UN VECTOR DE EXPRESION DE C/EBPA EN LA LINEA HEP-G2 RESTAURA LA EXPRESION TANTO ENDOGENA COMO LA TRANSCRIPCION DE C6, C7 Y FACTOR H, SUGIRIENDO QUE LA AUSENCIA DE EXPRESION DE ESTE FACTOR EN ESTA LINEA ES LA RESPONSABLE DE LA AUSENCIA DE EXPRESION DE C6, C7 Y FACTOR H EN ESTA LINEA. POR ULTIMO HEMOS ANALIZADO LOS MECANISMOS QUE REGULAN LA EXPRESION DE ESTOS GENES DURANTE LA RESPUESTA DE FASE AGUDA. EL IFN-Y ES EL PRINCIPAL ESTIM