Algunas aplicaciones del analisis por inyeccion en flujo como instrumento de lo s metodos enzimaticos

Resumen

Bajo el termino analisis enzimatico se engloba la determinacion de la actividad enzimatica y de la concentracion de sustratos, inhibidores o activadores que afectan directamente a la velocidad en una reaccion enzimatica. La alta selectividad de las enzimas permite la cuantificacion directa de analitos en matrices complejas. Las enzimas de uso analitico deben ser de alto grado de pureza, lo que conlleva, en la gran mayoria de los casos, un precio elevado. Al ejercer las enzimas funciones de catalizador en las reacciones implicadas, cabe la posibilidad de su reutilizacion, esto se consigue mediante la inmovilizacion sobre soportes inertes. Por otro lado, las caracteristicas de versatilidad, rapidez, economia, posibilidad de miniaturizacion, facil automatizacion, etc., inherentes al analisis por inyeccion en flujo (fia) constituyen un excelente complemento a los metodos enzimaticos. Dentro del abanico de posibilidades que ofrece la union fia-metodos enzimaticos, se presentan algunas aplicaciones que aparecen estructuradas en tres bloques. En cada uno de ellos se han estudiado la eleccion de las condiciones experimentales y de las configuraciones fia (con deteccion espectrofotometrica o fluorimetrica) mas adecuadas a los objetivos que se pretenden alcanzar. 1.- enzimas en disolucion. Determinacion de acido l-malico y aplicacion al analisis en productos enologicos. 2.- enzimas inmovilizadas. Inmovilizacion y coinmovilizacion de alcoholoxidasa (ao), formaldehido deshidrogenasa (fdh) y catalasa (cat) sobre vidrio de porosidad controlada (cpg). Determinacion de formaldehido y de metanol. 3.- inhibicion/reactivacion enzimatica. Estudio de la reactivacion de la acetilcolinesterasa (ache) inmovilizada sobre cpg, tras su inhibicion con pesticidas organofosforados. Determinacion de paraoxon.