Mecanismos de señalización y regulación de receptores de quimioquinas

Resumen

En esta tesis doctoral se describen nuevos mecanismos de señalización y regulación de receptores de quimioquinas. Estos receptores desempeñan un papel muy importante los procesos de migración, desarrollo y diferenciación de distintas poblaciones leucocitarias, así como también están implicados en el desarrollo de diversas patologías como asma, artritis reumatoide, esclerosis múltiple o infección por VIH-1. El estudio con el receptor de quimioquinas CCR2B ha demostrado la implicacion de la quinasa GRK2 en los mecanismos de la desensibilización de la señal de calcio mediada por el mismo tras su estimulacion com MCP-1. Esta quinasa es capaz de fosforilar a este receptor en residuos de serina y treonina en su extremo C-terminal, sin embargo la isoforma CCR2A de este receptor se fosforila en menor grado que CCR2B. La internalización de estos receptores se regula por la proteína B-arrestina 1, aunque la afinidad de estos receptores por la otra isoforma de esta failia de proteinas desacoplantes B-arrestina2 es distinta, puesto que solo CCR2B es capaz de promover una redistribucion de esta proteina, tras su estimulación con MCP-1. Estos estudios se han realizado mediante análisis de fosforilación in vitro con la quinasa recombinante, asi como por estudios de microscopía confocal y coinmunoprecipitación. Además el estudio de las proteínas implicadas en la activación de la vía de ERK a través de CCR2B indica la participación de las proteínas PKC y PI3K, así como la GTPasas dinamina y Ras. Aunque en estos procesos no es indispensable la internalización del receptor, sí que la via es modulada negativamente por la quinasa GRK2 tanto de manera dependiente como independiente de fosforilación del receptor. Estos analisis se llevaron a cabo mediante reconocimiento de la forma fosforilada y por tanto activa de ERK en células transfectadas con el receptor y la quinasa, y se confirmaron en línas celulares que expresan el rec