Caracterización de la capacidad oncogénica de la proteína quimérica BCR-JAK2

Resumen

Las traslocaciones cromosómicas que aparecen en algunos tumores producen frecuen- temente genes de fusión que codifican proteínas quiméricas con un papel clave en los procesos de oncogénesis. Varios trabajos recientes han descrito una fusión génica BCR- JAK2 en pacientes con leucemia mieloide crónica y aguda, pero hasta ahora no había estudios sobre la caracterización funcional de esta nueva proteína quimérica. En este trabajo hemos usado las técnicas de hibridación fluorescente in situ (FISH) y RT-PCR para describir un gen de fusión BCR-JAK2 en un paciente con leucemia aguda linfoblástica (LAL). BCR-JAK2 codifica una proteína que contiene el dominio de oligo- merización de BCR fusionado al dominio tirosín-quinasa de JAK2. El análisis in vitro de transfectantes transitorios mostró que esta proteína se localiza en el citoplasma. Poste- riormente, comprobamos que la línea prolinfocítica de ratón Ba/F3 transducida con vec- tores retrovirales que portan BCR-JAK2 se hace independiente de factores de crecimien- to para proliferar debido a la activación constitutiva subsiguiente de STAT5, que trasloca al núcleo y activa la transcripción de genes diana como Bcl-xL, Osm y Socs2. Las células primarias de ratón que expresan BCR-JAK2 también muestran una mayor capacidad de proliferación y supervivencia. Por último, el tratamiento de la línea celular de ratón Ba/ F3 con el inhibidor de JAK2 TG101209 demostró que este es capaz de suprimir la fosfori- lación de BCR-JAK2 y por tanto de STAT5, de modo que se reduce la expresión de genes diana y se activa el programa de muerte celular programada por apoptosis. Estos hallaz- gos sugieren que los pacientes adultos e infantiles con leucemia Ph- o sobreexpresión de JAK2 podrían beneficiarse de estas terapias moleculares dirigidas. Así, BCR-JAK2 es una nueva tirosín-quinasa con actividad transformadora que confiere independencia de estí- mulos para proliferar y sobrevivir y que puede ser inhibida por el compuesto TG101209. Para estudiar las propiedades oncogénicas de BCR-JAK2 in vivo realizamos ensayos de tumorogénesis en ratones inmunodeficientes, que demostraron que las células Ba/F3 BCR-JAK2 son capaces de generar tumores subcutáneos. Posteriormente, hemos gene- rado un modelo de leucemogénesis basado en el trasplante de progenitores de médula ósea con vectores retrovirales. Este modelo ha demostrado que la expresión de BCR- JAK2 en el compartimento hematopoyético conduce a un síndrome mieloproliferativo fatal con un período de latencia de 25 a 190 días y una supervivencia del 48%. Los ani- males trasplantados también mostraron síntomas típicos como leucocitosis, esplenome- galia, aumento de la población mieloide y presencia de progenitores mieloides tanto en sangre periférica como en médula ósea. En conjunto, todos estos datos demuestran las propiedades oncogénicas de BCR-JAK2 tanto in vitro como in vivo, y convierten nuestro modelo en una herramienta preclínica válida para el estudio de nuevos inhibidores de JAK2.