Estudio de la agregacion de polipeptidos hidrofobicos como modelo de proteinas intrinsecas de membrana

Resumen

SE HA PUESTO A PUNTO UNA ESTRATEGIA EXPERIMENTAL, BASADA EN HPSEC, QUE PERMITE HACER UN SEGUIMIENTO RAPIDO Y PUNTUAL DE LA GRAMICIDINA A INCORPORADA EN LIPOSOMAS EN TERMINOS DE DIMERO-MONOMERO DEL PEPTIDO. ASI, UTILIZANDO ESTA METODOLOGIA, SE HA PODIDO ESTABLECER QUE LA CONFORMACION QUE ADOPTA EL PEPTIDO EN EL LIPOSOMA VIENE DETERMINADA POR EL DISOLVENTE ORGANICO DE PARTIDA. SOLAMENTE CON DISOLVENTES MUY POLARES (CON UN PREDOMINIO DE FORMAS DIMERICAS) ES POSIBLE INCORPORAR DIRECTAMENTE LE PEPTIDO EN LA CONFIGURACION HELICE B SEGUN DEMUESTRA EL ESTUDIO COMPARATIVO DEL HPLC Y DICROISMO CIRCULAR. TAMBIEN SE HA DEMOSTRADO QUE EL ESTADO CONFORMACIONAL DE LA GA EN MEMBRANAS MODELO VARIA CON EL TIEMPO DE INCUBACION DE LAS VESICULAS, LA RAZON MOLAR LIPIDO/PEPTIDO, TIEMPO DE SONICACION, TEMPERATURA, TIPO DE LIPIDO O METODO DE INCORPORACION, CON UN PREDOMINIO DE FORMAS MONOMERICAS EN EL EQUILIBRIO. TAMBIEN LA METODOLOGIA UTILIZADA HA PERMITIDO POR PRIMERA VEZ, LA SEPARACION DE ESPECIES DIMERICAS Y MONOMERICAS DE UNA SERIE DE OLIGOFENILALANINAS EN DISOLUCION EN THF E INCORPORADAS EN LIPOSOMAS. DE ESTE MODO, HA SIDO POSIBLE EVALUAR LA INFLUENCIA DE LA LONGITUD DE CADENA DEL OLIGOPEPTIDO SOBRE LA ESTABILIDAD DE LAS ESPECIES DIMERICAS ANALIZANDO EL DESPLAZAMIENTO DEL EQUILIBRIO DIMERO-MONOMERO EN CADA CASO. ADEMAS SE HAN DADO LOS PASOS PRELIMINARES EN EL ESTUDIO DE LA INTERACCION DE PEPTIDOS CATIONICOS CON LIPOSOMAS SIENDO LOS RESULTADOS MUY PROMETEDORES. SE HA PODIDO VISUALIZAR POR HPLC CAMBIOS EN LOS LIPOSOMAS INDUCIDOS POR LA MELITINA EN FUNCION DEL TIEMPO, CON UNA DESAPARICION TOTAL DE VESICULAS CUANDO LA RAZON MOLAR LIPIDO/PEPTIDO ES BAJA.