Caracterización molecular del melanoma maligno mediante una aproximación genética y epigenética

Resum

El melanoma es un tumor procedente de los melanocitos cuya incidencia ha ido en ascenso en las últimas décadas. La clasificación clásica del melanoma establece cuatro subtipos principales: melanoma de extensión superficial, melanoma nodular, léntigo maligno melanoma, y melanoma lentiginoso acral. Esta clasificación se basa principalmente en la presentación clínica e histopatológica, y el patrón de crecimiento del melanoma; sin embargo, su utilidad es limitada ya que carece de valor pronóstico. El reciente desarrollo de nuevas tecnologías de secuenciación como la secuenciación masiva o next-generation sequencing (NGS), ha permitido realizar un cribado exhaustivo de las alteraciones moleculares implicadas en la etiopatogenia del melanoma, confirmando la implicación de genes previamente descritos (BRAF, NRAS, KIT, GNAQ, GNA11), e identificando nuevas mutaciones en otros genes (TERT, RAC1, ADAMTS18, EPHA7, ERBB4, PPP6C, TAF1L, NF1 e IDH1) que podrían tener implicaciones en el diagnóstico, pronóstico y tratamiento de los pacientes. . La mayoría de los estudios de NGS se basan en aproximaciones de alto coste y elevada complejidad, como WGS (Whole Genome Sequencing) y WES (Whole Exome Sequencing). La secuenciación de regiones exónicas específicas mediante la aplicación de paneles de genes específicos ha demostrado mayor utilidad en la práctica clínica por su menor coste y una mayor facilidad para la interpretación de los resultados; sin embargo, son escasos los diseños de paneles centrados únicamente en el estudio de los genes implicados en melanoma. Asimismo, se ha propuesto la implicación de los factores epigenéticos en la etiopatogenia del melanoma. Recientemente se han descrito hipermetilaciones anómalas en la región promotora de más de 100 genes, algunos de los cuales podrían tener valor pronóstico y de monitorización de respuesta. Respecto a la regulación post-transcripcional, se han identificado múltiples microRNAs implicados en la melanogénesis a partir de estudios de expresión en tejido y funcionales en líneas celulares. El objetivo de la presente Tesis Doctoral es realizar una caracterización molecular de una serie de melanomas mediante una aproximación genética y epigenética, para tratar de establecer una clasificación molecular que tenga valor diagnóstico, pronóstico y terapéutico. Para ello, se ha realizado un estudio observacional retrospectivo en 210 pacientes diagnosticados de melanoma. Se ha abordado el estudio de las alteraciones genéticas mediante NGS gracias al diseño de un panel específico de melanoma, así como el estudio de las alteraciones epigenéticas mediante el estudio de metilación en el promotor de genes supresores tumorales por MS-MLPA (amplificación múltiple empleando sonda dependiente de ligación sensible a metilación) y mediante el estudio de microRNAs mediante arrays de expresión y PCR cuantitativa en tiempo real (RT-PCR).